健脾軟肝方及拆方抗肝纖維化配伍機(jī)理初步研究.pdf

1、探討健脾軟肝方全方對(duì)四氯化碳肝纖維化大鼠膠原沉積的影響，分析健脾軟肝方全方與拆方藥效學(xué)配伍關(guān)系 方法： 1．四氯化碳(CCl<,4>)皮下注射與高脂低蛋白飲食復(fù)合因素復(fù)制大鼠肝纖維化模型，隨機(jī)分成正常組、模型組、復(fù)方鱉甲軟肝片對(duì)照組、健脾軟肝方全方組，拆方組按中醫(yī)病因病機(jī)及治法進(jìn)行拆方分為健脾活血軟肝組、理氣活血軟肝組、活血軟肝組、健脾理氣組，共8組。 2．測(cè)定大鼠體重、肝臟濕重、脾重。肝組織HE染色觀察肝臟炎

2、癥、脂肪變性，天狼猩紅膠原染色觀察肝臟纖維化病理和形成程度。 3．試劑盒方法測(cè)定大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)活性、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性、白蛋白含量(Alb)、總蛋白含量；ELISA法測(cè)定血清Ⅲ型膠原含量。 4．鹽酸水解法測(cè)定肝組織羥脯氨酸(HYP)含量；Western印跡法分析肝組織I型膠原、A-SMA、MMP-2，MMP-9蛋白表達(dá)；明膠酶圖法測(cè)定肝組織MMP-2、MMP-9活性表達(dá)。 5

3、．肝組織免疫組化染色觀察肝組織I型膠原蛋白在肝組織的表達(dá)部位。 結(jié)果： 1．四氯化碳(CCl<,4>)皮下注射與高脂低蛋白飲食復(fù)合因素造模肝纖維化明顯，血清肝功能明顯異常。造模6w末結(jié)束時(shí)，模型組肝組織病理呈持續(xù)纖維化及慢性損傷，并且肝內(nèi)有明顯膠原沉積；血清ALT與AST活性及Ⅲ型膠原含量明顯增加；肝組織HYP含量，I型膠原、a-SMA蛋白表達(dá)，MMP-2,MMP-9的蛋白含量及活性顯著增高，表現(xiàn)為顯著的肝纖維化

4、病理特點(diǎn)。 2．健脾軟肝方全方能顯著降低模型大鼠ALT活性，改善肝組織膠原沉積、降低血清Ⅲ型膠原及肝組織HYP含量，顯著降低MMP-2,MMP-9的活性及蛋白表達(dá)含量，明顯抑制肝組織I型膠原與a-SMA蛋白表達(dá)。 3．模型大鼠肝組織I型膠原蛋白表達(dá)明顯增加，免疫組化顯示I型膠原蛋白主要表達(dá)于肝細(xì)胞脂肪變性壞死及纖維間隔區(qū)域，健脾軟肝方全方組、鱉甲軟肝片組及理健脾軟肝方及拆方抗肝纖維化配伍機(jī)理初步研究氣活血軟肝組I型膠

5、原蛋白陽(yáng)性表達(dá)有明顯減少。 4．健脾軟肝方全方與鱉甲軟肝片具有相同的抗肝纖維化作用，健脾軟肝方全方在血清Ⅲ型膠原和I型膠原蛋白含量較鱉甲軟肝片顯著降低。 5．健脾軟肝方全方在各個(gè)指標(biāo)均優(yōu)于各拆方組，其中以理氣活血軟肝藥效最為接近。 結(jié)論： 1．四氯化碳(CCl<,4>)皮下注射與高脂低蛋白飲食復(fù)合因素復(fù)制大鼠肝纖維化模型，6周末肝纖維化病理改變明顯，同時(shí)有不同程度脂肪變性。 2．健脾軟肝方全方及拆方

6、能顯著改善模型大鼠肝功能、減輕肝臟脂肪變性，保護(hù)肝臟，具有良好護(hù)肝作用，尤以健脾軟肝方全方組改善ALT作用最好：健脾理氣類為主要治法的拆方能提高蛋白含量。 3．健脾軟肝方全方及拆方能顯著減少血清Ⅲ型膠原含量，降低肝組織I型膠原蛋白表達(dá)及HYP含量，改善病理炎癥及膠原沉積表現(xiàn)，起到良好的改善肝組織膠原沉積，促進(jìn)膠原降解作用，尤以健脾軟肝方全方藥效最佳。 4．健脾軟肝方全方及拆方能降低模型組肝組織a-SMA蛋白表達(dá)，抑制HS