OsWRKY10基因的水稻突變體互補(bǔ)轉(zhuǎn)化及在煙草中的初步功能分析.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文OsWRKY10基因的水稻突變體互補(bǔ)轉(zhuǎn)化及在煙草中的初步功能分析姓名：趙佩歐申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：郭澤建20050501A b s t r a c tW R K Y t r a n s c r i p t i o nf a c t o r s ，w h i c ha p p e a rt oe x i s ti np l a n t se x c l u s i v e l y , a r ei

2、 n v o l v e di nr e s p o n s e s t o p a t h o g e n ，a b i o t i c s t r e s s e s ，a n d i n r e g u l a t i o n o fd i v e r s e d e v e l o p m e n t a l o rp h y s i o l o g i c a lp r o c e s s e s ．T h e yh a v

3、eb e c o m em a j o ra r e a so f r e s e a r c hf o c u si np l a n tm o l e c u l a rb i o l o g y ．An o v e lg e n e e n c o d i n gW R K Y t r a n s c r i p t i o nf a c t o r , n a m e dO s W R K Y I O ，w a s i s o

4、l a t e df r o mar i c ee D N A l i b r a r yb yP C R s t r a t e g yw i t hp r i m e r sd e s i g n e da c c o r d i n gt ot h ef l a n k i n gs e q u e n c eo f T 4 5 6c l o n e db yaT a i l - P C R ．T 4 5 6i sa d e l

5、a y e d —i n - d e v e l o p m e n tm u t a n ts c r e e n e df r o m t h e T o D N A i n s e r t i o nm u t a n t p o p u l a t i o n ( Z H l 1 ) ．I nt h i s s t u d y , G 3 ( f u l ls e q u e n c eo fO s W R K Y I O w

6、i t h 2 k b —l e n g t h o fi t s p r o m o t e r ) w a si n s e r t e di n t oap C a m b i a l 3 0 1v e c t o r f o rc o n s t r u c t i n gt h ep l a n te x p r e s s i n gv e c t o rp C a m —G 3 ．T h e n ，t h i sv e c

7、 t o rt o g e t h e rw i t ha n o t h e rp l a n te x p r e s s i n gv e c t o rp C H F 3 ，c a r r y i n ga s e l e c t a b l em a r k e ro f N P T I I , w e r et r a n s f o r m e di n t oT 4 5 6 b yp a r t i c l eb o m

8、 b a r d m e n t ．T h r e ei n d e p e n d e n tt r a n s g e n i cr i c ep l a n t sw e r ea c q u i r e d ，a n dc o n f i r m e db yP C R ．T w od i s t i n c tp h e n o t y p e sw e r es h o w e di nT ot r a n s g e n

9、i cr i c ep l a n t s ．O n el i n ew a s s i m i l a rt oT 4 5 6 ，w h i l et h eo t h e rt w ol i n e sw e r e m o r e s i m i l a rt oZ H l 1 ．I tw a s p r e s u m e d t h a tt h em o r p h o l o g y o f T 4 5 6 w a s c

10、 o n t r o l l e db y ap a i ro f r e c e s s i v em u t a n tg e n e ，a c c o r d i n gt ot h ed i f f e r e n t i a t i o no f T 4 5 6s e l f - c r o s s e dp r o g e n yT h i s s u g g e s t s t h a t t h e p h e n o

11、t y p e o fT 4 5 6 w a s c a u s e d b y t h e e x p r e s s i o n v a r i a t i o n o fO s W R K l ，，D ．I no r d e rt os t u d yt h ef u n c t i o no fO s W R K Y I O g e n em o r ec l e a r l y , w eo v e r e x p r e s

12、 s e dt h i sg e n ei nt o b a c c o ．T w op l a n te x p r e s s i v ev e c t o r s ，p C a m U —O s W R K Y l 0 ·G F P ( c o n t a i n i n gaf u s i o ng e n e o fO s W R K Y l 0a n d g r e e n f l u o r e s c e n

13、t p r o t e i n ，G F P ) a n dp C a m U —O s W R K Y I O , w e r ec o n s t r u c t e da n dt r a n s f o r m e di n t o t o b a c c ob yA ．t u m e f a n c i e n s - m e d i a t e dm e t h o d ．1 6a n d 1 4i n d e p e n

14、d e n tt r a n s g e n i c t o b a c c o p l a n t s w e r e o b t a i n e d r e s p e c t i v e l y ，a n d d e t e c t e d b yP C Rm e t h o d ．T h e r e s u l ts h o w e d t h a tt h eg e n e s w e r ei n t e g r a t e

15、 di n t ot h eg e n o m e s o f t o b a c c op l a n t s ．G r e e nf l u o r e s c e n c ew a sv i s u a l i z e du n d e rb l u el i g h te x c i t a t i o ni n c e l l so f r o o t si nt r a n s g e n i ct o b a c c o

16、p l a n t s b y f l u o r e s c e n c e m i c r o s c o p y ．T h i s s t u d y r e v e a l e d t h a t O s W R K Y l 0w a se x c l u s i v e l yl o c a l i z e d i n t h en u c l e a r , s u g g e s t i n gt h a t i t w