擬南芥菌核病抗性增強(qiáng)突變體的篩選及CIPK23基因的功能分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、由Sclerotiniasclerotiorum(Lib.)deBary引起的菌核病是分布最廣、危害最嚴(yán)重的油料、蔬菜等作物病害之一，但是對該病的抗病和致病機(jī)制的研究均欠深入。擬南芥具有基因組小、結(jié)構(gòu)簡單、形體小、生長周期短、繁殖系數(shù)高、自花授粉等優(yōu)點(diǎn)，且其基因組全序列測定工作已于2000年12月完成。為此，我們以模式植物擬南芥(Arabidopsisthaliana)為材料，摸索了抗菌核病突變體的篩選方法，篩選獲得了一批突變體，對ci

2、pk23失活突變體進(jìn)行了克隆和功能驗(yàn)證，取得了如下主要結(jié)果： 1.用草酸噴霧接種法、草酸平板篩選法、核盤菌噴霧接種法、核盤菌離體葉片接種法篩選擬南芥菌核病抗性增強(qiáng)突變體，結(jié)果表明用離體葉片接種法篩選是最好的。 2.用離體葉片法篩選了5萬株擬南芥激活標(biāo)簽突變體。共篩選出菌核病抗性增強(qiáng)突變體50株；44株通過TAIL-PCR擴(kuò)增獲得T-DNA插入側(cè)翼序列；34株測序比對獲得有效序列。其中5株突變體M150、M138、M12、

3、M833、Mc140的T-DNA為同一插入位點(diǎn)，均插在At1g30270(calcineurinB-likecalciumsensor(CBL)-interactingproteinkinase23)-Cipk23內(nèi)部，故通稱為CIPK23突變體。 3.分析發(fā)現(xiàn)這一突變體對鹽更敏感，而且該性狀屬顯性突變，故推測為T-DNA插入引起上下游基因增強(qiáng)表達(dá)所致；RT-PCR驗(yàn)證表明增強(qiáng)子下游基因Atlg30280表達(dá)量比野生型顯著提高，

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