不同寄生蜂寄生后小菜蛾精巢mRNA的表達(dá)差異.pdf

1、本文以蔬菜重要害蟲——小菜蛾P(guān)lutellaxylastella(Linnaeus)及其優(yōu)勢種天敵菜蛾盤絨繭蜂Cotesiaplutella、半閉彎尾姬蜂Diadegmasemiclausum寄生體系為研究對象，利用近年發(fā)展起來的基因篩選方法，通過比較正常小菜蛾精巢與被寄生小菜蛾精巢之間基因表達(dá)的差異，分離并克隆寄生蜂抑制小菜蛾精巢的相關(guān)基因，在分子水平揭示不同體系中2種PDV對相同寄主的生理調(diào)控機(jī)制，為明確兩類寄生蜂病毒(Bracov

2、irus和Ichnovirus)在同一寄主體內(nèi)表達(dá)方式和調(diào)控寄主的作用途徑提供依據(jù)。 本試驗(yàn)以正常小菜蛾精巢和被兩種不同寄生蜂寄生過的小菜蛾精巢為研究對象，提取組織總RNA，利用mRNA差異顯示(differentialdisplayPCR，DDRT-PCR)的技術(shù)，以隨機(jī)引物1～8與錨定引物T11M(M為A，C或G)配合，PCR擴(kuò)增cDNA后，1％的瓊脂糖凝膠電泳，篩選PDV特異性表達(dá)的cDNA片斷。并對篩選出來的cDNA片斷

3、進(jìn)行二次PCR、純化、克隆、測序、序列分析和設(shè)計(jì)引物驗(yàn)證等實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果表明，經(jīng)差異擴(kuò)增與電泳后，可見十余條差異條帶，將這些差異條帶進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，回收純化，并與PTl8-T載體進(jìn)行連接，經(jīng)藍(lán)白斑篩選后進(jìn)行測序，通過GeneBank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行了序列的同源性比較，發(fā)現(xiàn)除一條cDNA片斷序列外，其余所有的序列與數(shù)據(jù)庫中的序列比較，沒有同源序列，而那條比對上的序列與一種植物的序列有100％的同源性，疑為被污染。根據(jù)序列的cDNA片斷設(shè)計(jì)