小菜蛾取食誘導(dǎo)的菜心mRNA表達(dá)譜及差異表達(dá)基因克隆.pdf

1、植物遭受昆蟲取食后會產(chǎn)生一系列生理反應(yīng)。在長期的協(xié)同進(jìn)化過程當(dāng)中,植物逐漸形成了各種應(yīng)對害蟲取食的自我防御機制。這包括組成型防御機制和誘導(dǎo)型防御機制兩大類。其中誘導(dǎo)型防御是植物防御侵害的主要機制,其研究正日益受到人們的重視,但蔬菜受到害蟲取食為害后的誘導(dǎo)型防御的分子反應(yīng)機制報道尚少。
　　 本研究利用新一代測序技術(shù)平臺Illumina Solexa Genome Analyser分析菜心(Brassica parachinese

2、)被小菜蛾(Plutella xylostella)取食脅迫后mRNA表達(dá)譜的變化情況。分別在小菜蛾取食0.5h、4h、8h、12h四個時間點上采集對照組和處理組的葉片樣品,提取總RNA,最后分別將各組4個時間點的總RNA等量混合。通過Solexa測序,兩個RNA樣本分別得到7373393和6400927個cleantag,其中有208023和174926的distinct tag。經(jīng)過生物信息學(xué)分析得到7773個差異表達(dá)tag,能在參

3、考基因數(shù)據(jù)庫中唯一比對到一個基因的有125個,其中40個上調(diào)表達(dá),85個下調(diào)表達(dá)。這些基因編碼MYB類轉(zhuǎn)錄因子、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶、鋅指蛋白、普遍脅迫蛋白、銅鋅超氧化物歧化酶前體、熱激蛋白、葉綠素a/b結(jié)合蛋白、光系統(tǒng)Ⅱ蛋白、S-腺苷甲硫氨酸合成酶、3-磷酸甘油醛脫氫酶、ADP-葡萄糖焦磷酸化酶、果膠甲酯酶、質(zhì)膜水孔蛋白、磺基轉(zhuǎn)移酶、組蛋白H3等,另有17個基因功能未知,12個沒有有意義的比對結(jié)果。已有的研究表明,其中有許多基因在植

4、物受其它逆境脅迫時也被誘導(dǎo)表達(dá)?；虮倔w及代謝途徑分析發(fā)現(xiàn)這些基因參與植物抗逆過程中的的光合作用、能量代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因表達(dá)調(diào)控、脅迫反應(yīng)、碳和脂肪酸代謝、蛋白質(zhì)代謝、生長發(fā)育、細(xì)胞結(jié)構(gòu)組分、質(zhì)膜與物質(zhì)運輸?shù)?。通過RACE技術(shù)克隆出兩個核酸片段,BLASTnr比對分析推測它們分別為金屬硫蛋白和光合系統(tǒng)Ⅱ多肽蛋白的片段。
　　 本研究從mRNA水平上分析菜心被小菜蛾取食誘導(dǎo)的基因表達(dá)變化情況,明確了125個基因受小菜蛾取食誘導(dǎo)的