17366.小鼠植入前胚胎h3k4三甲基化模式比較及甲基化酶啟動(dòng)子分析

1、獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文。I特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：舡njr司：勱，1年∥月∥日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，

2、即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查INIH借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名：第一導(dǎo)師簽名：船HJIN：勁f嘩(目《日時(shí)問：加，1年／月7日摘要fIIflfIfffIfflIfllIf㈣lfIffflIIffIIfIlIIf＼2149708組蛋H3K4：：甲基化被認(rèn)為是

3、轉(zhuǎn)錄活躍的標(biāo)志，它在轉(zhuǎn)錄重編程效率上起著重要的作用。本文為了考察體外操作及體外培養(yǎng)環(huán)境的變化對小鼠植入前胚胎組蛋白H3K4三甲基化模式的影響，從而揭示核移植重編程效率低的問題。本文主要利用間接免疫熒光法對小鼠植入前體內(nèi)外受精的各期胚胎以及MII期卵母細(xì)胞的組蛋白H3K4_三甲基化水平進(jìn)行檢測。同時(shí)進(jìn)一步，葉jTSA處理體外受精各期胚胎，以檢測組蛋白乙?；瘜M蛋白H3K4三甲基化的影響。我們研究結(jié)果表明在MII期卵母細(xì)胞的組蛋白H3K4三

4、甲基化的免疫熒光密集的分布在中期染色體上；在體內(nèi)受精從受精卵到囊胚各期胚胎中組蛋白H3K4U甲基化的模式類似于體外受精的各期胚胎，其免疫熒光強(qiáng)度先下降，到4細(xì)胞期時(shí)最弱，后有逐漸增強(qiáng)。而在原核期中，顯示出兩性原核的不對稱性即雌性原核強(qiáng)于雄性原核，這種不對稱性一直維持到2細(xì)胞期：然而體內(nèi)外受精主要的不同是在于體內(nèi)受精各期胚胎的H3K4Z甲基化的熒光強(qiáng)度更高一些。此外，在TSA處理組中組蛋白H3K4Z甲基化熒光強(qiáng)度與體外受精胚胎相比增加了，

5、些。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明培養(yǎng)條件和環(huán)境的改變可能是促使組蛋白修飾改變的重要原因之一。在將來的研究中我們一定更加關(guān)滓激素在表觀遺傳修飾中的重要作用。作為基因表達(dá)開關(guān)的啟動(dòng)子是開啟基因表達(dá)重要順式元件，町以受到反式因子的調(diào)控進(jìn)而啟動(dòng)或關(guān)閉。在基因表達(dá)時(shí)，H3K4甲基化轉(zhuǎn)移酶可以引起H3K4發(fā)生甲基化的酶類，其中最重要的是MII家族。本研究中，我們克隆小鼠Mll2、Mll4、Mll5基因啟動(dòng)子，并構(gòu)建了Mll2、腳心、Mll5基因啟動(dòng)予57缺失

6、片段一pGL3以及NanogpcDNA31，Sox2pcDNA31，Oct4pcDNA31，cMycpcDNA31，Klf4pcDNA31五個(gè)轉(zhuǎn)錄因子單獨(dú)或共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞對H3K4甲基化轉(zhuǎn)移酶肩動(dòng)子活性進(jìn)行分析。研究結(jié)果表明：通過M／／2、M搿、Mll5基因啟動(dòng)子57缺失片段pGL3單獨(dú)轉(zhuǎn)化HEK293細(xì)胞，我們發(fā)現(xiàn)Mll2啟動(dòng)子活性區(qū)域位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游1679bp附近，腳，4啟動(dòng)子活性區(qū)域位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游1575bp~