miR-129-2基因啟動子甲基化與喉癌的關系.pdf

1、喉癌是頭頸部最常見的腫瘤，喉癌的發(fā)生發(fā)展目前尚無明確病因，可能是由下列多種因素共同作用導致，主要有吸煙、飲酒、病毒感染、性激素、職業(yè)暴露等有關。喉鱗狀細胞癌的發(fā)生是個多因素互相作用并共同參與、長期的、復雜的連續(xù)過程。盡管人們對喉癌的影響因素和分子機制有了一定的了解，喉癌治療的五年生存率仍低于50％，喉癌的最常見病理分型為鱗狀細胞癌，喉癌的早期診斷及喉癌復發(fā)的早期判斷對喉鱗癌的治療及預后至關重要,而目前人們對于相關的分子機理及分子標志的認

2、識還很有限。基因甲基化是表觀遺傳學中的一種，在哺乳動物細胞中，幾乎所有的 DNA甲基化都發(fā)生在 CpG島胞嘧啶，研究證實，啟動子區(qū) CpG島異常甲基化是最多見的生物學標志之一，可能對癌癥治療包括早期癌癥檢測，表觀遺傳學腫瘤分類，預測腫瘤預后，治療干預等有很大幫助。研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有密切的關系。喉癌組織中有多種 miRNAs異常表達。MicroRNAs是一系列小的非編碼 RNAs,通過調(diào)節(jié)目標基因的表達而引起mRN

3、A的表達下降或抑制mRNA轉錄。miR-129-2是微小RNA中的一員,其基因位于染色體11p11.2。己有研究報道, miR-129-2的異常表達與子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌、胃癌等許多人類腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關。但是miR-129-2與 LSCC關系的研究卻較為少見.為了深入理解喉鱗狀細胞癌發(fā)生及發(fā)展的分子生物學機理,尋找鑒定相應的分子生物學指標志，為進一步治療喉癌奠定基礎。本文將對miR-129-2與喉鱗癌的關系作進一步的研究。
　　

4、目的
　　1.研究miR-129-2基因啟動子在喉癌組織和匹配癌旁組織，以及喉癌細胞系的甲基化狀態(tài)。
　　2.研究 miR-129-2在喉癌組織的表達水平及 miR-129-2甲基化與其表達水平的關系。
　　3.miR-129-2過表達對喉癌細胞增殖的影響。
　　方法
　　采用甲基化敏感性特異性聚合酶鏈反應（MSRE-qPCR）的方法測定喉癌細胞系Hep-2細胞和29對喉癌組織和癌旁組織中miR-129-2

5、基因的甲基化水平。每一標本的 HM（甲基化強度）≥10%定義為發(fā)生甲基化。0%　　采用熒光定量PCR方法測定喉癌患者癌組織及匹配的癌旁組織中miR-129-2基因的 mRNA表達水平,以β-actin作為內(nèi)參基因。通過測定樣本中目的基因miR-129-2模板的Ct值來反應模板的含量。對每一個樣本，用ΔCt(Ctmir129-2-Ctβ-actin)值表示目的基因與內(nèi)參基因間的 Ct差值。應用去甲基化

6、藥物分析甲基化對喉癌細胞中 miR-129-2基因表達的影響。最后利用 MTT實驗在喉癌細胞系中驗證miR-129-2對腫瘤相關特性的影響。
　　結果
　　1.熒光定量PCR檢測甲基化結果
　　結果顯示，miR-129-2啟動子區(qū)在喉癌細胞系Hep-2細胞中發(fā)生了甲基化。在喉癌組織中 miR-129-2甲基化頻率為58.62%（17/29），在癌旁組織未發(fā)生miR-129-2甲基化.
　　2.miR-129-2在

7、喉癌組織及癌旁組織的表達水平
　　喉癌組織中miR-129-2表達水平低于癌旁組織（P<0.05）.
　　3.喉癌細胞系去甲基化處理結果
　　Hep-2細胞系在去甲基化和去乙?；幬锾幚砗笈c空白對照相比， miR-129-2的表達明顯增高。
　　4.MTT實驗結果
　　Hep-2細胞中過表達miR-129-2基因后，與轉入空載質粒對比，細胞的生長明顯受到抑制。
　　結論
　　1.miR-129-