規(guī)模化豬場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型感染的PCR檢測(cè)及四川病毒株的分離鑒定.pdf

1、豬圓環(huán)病毒(PCV)的開(kāi)放閱讀框2(ORF2)是其主要結(jié)構(gòu)蛋白(Cap)的編碼基因,也是區(qū)分豬圓環(huán)病毒1型(PCV1)和豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)的重要基因,該研究參照GenBank已發(fā)表的15株P(guān)CV2基因序列,設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物,對(duì)PCV2的ORF2基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳,呈現(xiàn)一條大小約0.67kb的特異條帶,經(jīng)條件篩選,建立了豬病料中PCV2感染的PCR檢測(cè)方法.采用建立的PCR方法對(duì)四川9個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)104頭豬的

2、病料進(jìn)行PCV2檢測(cè),結(jié)果表明,受檢豬的組織及血清樣品中PCV2的總檢出率為77.9﹪,證實(shí)四川規(guī)?；i場(chǎng)存在PCV2感染.對(duì)PCV2感染豬的癥狀及病理變化進(jìn)行觀察,結(jié)果表明,患豬主要表現(xiàn)為仔豬生長(zhǎng)不良、腹瀉及懷孕母豬流產(chǎn)等癥狀,患豬精神不振、消瘦,發(fā)生黃疸.剖檢可見(jiàn)全身淋巴結(jié)顯著腫大,肺臟出血、水腫以及發(fā)生肉樣變等病理?yè)p傷,病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)組織器官內(nèi)淋巴細(xì)胞減少,生發(fā)中心內(nèi)淋巴細(xì)胞消失,在巨嗜細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)嗜堿性包涵體.將PCR檢測(cè)為陽(yáng)

3、性的病料接種PK15細(xì)胞,盲傳6代后進(jìn)行電鏡觀察,結(jié)果在PK15細(xì)胞的細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)包涵體.細(xì)胞質(zhì)中包涵體電子密度深,位于核膜周圍,內(nèi)有呈晶格狀排列的病毒粒子,直徑12±2nm;細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)消散,在細(xì)胞核內(nèi)發(fā)現(xiàn)多個(gè)電子密度深的、圓形或環(huán)狀、由大量異染色質(zhì)組成的包涵體,內(nèi)有細(xì)微的粒狀物質(zhì).分離鑒定獲得PCV2四川毒株1株.將病毒在PK15細(xì)胞上傳6代后,提取病毒DNA,設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增全序列,并進(jìn)行全基因組序列的測(cè)定與分析.結(jié)果表明病

4、毒的全基因組為1767bp,與國(guó)內(nèi)外分離毒株(15株)的全基因組序列比較發(fā)現(xiàn),該分離株與中國(guó)湖南分離株(AY556477)的同源率為97.5﹪,與歐洲、美洲、南非毒株的同源率在94.2-96﹪之間.本研究建立了針對(duì)PCV2 ORF2基因的PCR檢測(cè)方法,可對(duì)病料、血清提取DNA進(jìn)行檢測(cè),在7小時(shí)內(nèi)得出結(jié)果.該方法可用于PCV2感染豬的快速診斷,可用于PCV2感染的流行病學(xué)調(diào)查、引種檢疫等.該研究豐富了中國(guó)PCV2感染的流行病學(xué)資料,為規(guī)