擬南芥低氮耐性突變體的篩選及其生理特性研究.pdf

1、化肥的施用對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的突破性發(fā)展功不可沒,但長期大量、單一地施用化肥特別是化學(xué)氮肥所帶來的肥料利用率降低、農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)下降和環(huán)境污染問題正日益突出,已經(jīng)對農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展產(chǎn)生嚴(yán)重的負(fù)面影響.而現(xiàn)代育種策略通常是在養(yǎng)分充足的條件下進(jìn)行的,這也使得蘊(yùn)藏在植物資源中能在低養(yǎng)分脅迫環(huán)境下高效吸收和利用養(yǎng)分的遺傳潛力未能發(fā)揮.激活標(biāo)簽法(ACTIVATION TAGGING)是新近發(fā)展起來的一種用于基因分離和鑒定的方法.該論文實(shí)驗(yàn)利用激活突變使特定

2、內(nèi)源基因發(fā)生過量表達(dá)而產(chǎn)生顯性功能獲得型突變的方法,創(chuàng)建大規(guī)模的擬南芥突變體庫,以這些轉(zhuǎn)化植株作為突變體篩選的材料.通過反復(fù)的比較實(shí)驗(yàn),自行設(shè)計(jì)專為擬南芥水培設(shè)計(jì)的植物漂浮裝置,該裝置由兩部分組成:浮板和容器.裝有石英砂的浮板既可滿足種子的直播培養(yǎng),又可以進(jìn)行幼苗的移栽培養(yǎng).采用發(fā)芽、幼苗等實(shí)驗(yàn)確定篩選擬南芥低氮耐性突變體的適宜濃度,其含氮量為0.18mmol/L.在該濃度下,野生型基本受到抑制而不能表現(xiàn),而突變體的優(yōu)勢則得到發(fā)揮.利用

3、上述實(shí)驗(yàn)確定的漂浮裝置和選擇壓,對建好的突變體庫中的種子(T<,2>)進(jìn)行大規(guī)模、高通量的突變體篩選.培養(yǎng)過程中,以葉綠素SPAD值為主要篩選指標(biāo),并且輔之于其它較為明顯的生物學(xué)性狀,第一輪從中篩選出6株生長良好的植株(T<,3>);第二輪從中篩選出7株生長較好的植株(T<,4>);第三輪則從中篩選出于8株植株(T<,5>).將三輪篩選得到的其中4株可能突變體(T<,5>),首先進(jìn)行抗除草劑特性的鑒定實(shí)驗(yàn),從其后代(T<,6>)中分離出