陜西省常見(jiàn)四種實(shí)蠅的分子鑒定.pdf

1、該文利用RAPD技術(shù)和PCR方法在國(guó)內(nèi)首次對(duì)實(shí)蠅的分子鑒定進(jìn)行了研究,旨在找到一種能準(zhǔn)確、快速鑒定實(shí)蠅的方法,主要結(jié)果如下:1、利用目前國(guó)內(nèi)提取干標(biāo)本DNA的多種方法,如CTAB法、SDS法等試驗(yàn)結(jié)果表明,常規(guī)保存條件下,保存一年左右的干標(biāo)本很難進(jìn)行DNA的提取,不管采用何種方法,大多數(shù)標(biāo)本均不能提取到DNA;僅少數(shù)保存比較好的干標(biāo)本,可以提取出DNA并進(jìn)行PCR擴(kuò)增.而利用CTAB法、SDS法等方法對(duì)絕大多數(shù)保存在超低溫冰箱中的干標(biāo)本

2、都能提取到足量的DNA.2、在多次篩選試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,優(yōu)化了實(shí)蠅的RAPD體系,建立了一套穩(wěn)定的實(shí)蠅鑒定RAPD反應(yīng)體系,為今后采用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行實(shí)蠅鑒定奠定了一定的基礎(chǔ).3、從69條引物中篩選出S361、S67和S252可以對(duì)南瓜實(shí)蠅、具條實(shí)蠅和三點(diǎn)棍腹實(shí)蠅進(jìn)行區(qū)別鑒定;S112引物可以對(duì)具條實(shí)蠅、桔大實(shí)蠅和三點(diǎn)棍腹實(shí)蠅進(jìn)行區(qū)別鑒定;S126和S134可以對(duì)具條實(shí)蠅和三點(diǎn)棍腹實(shí)蠅進(jìn)行區(qū)別鑒定,S83可以對(duì)南瓜實(shí)蠅的雌性和雄性進(jìn)行鑒定

3、.4、利用3條擴(kuò)增結(jié)果穩(wěn)定、清晰的引物,每種實(shí)蠅用7個(gè)個(gè)體對(duì)4種實(shí)蠅的種內(nèi)穩(wěn)定性進(jìn)行了研究,結(jié)果表明南瓜實(shí)蠅、具條實(shí)蠅、桔大實(shí)蠅和三點(diǎn)棍腹實(shí)蠅的種內(nèi)平均相似系數(shù)分別為0.551、0.538、0.373、0.778,從相似系數(shù)可以看出三點(diǎn)棍腹實(shí)蠅種內(nèi)最穩(wěn)定,其次為南瓜實(shí)蠅和具條實(shí)蠅,桔大實(shí)蠅種內(nèi)分化最大.5、用S61、S83、S107、S264、S265、S266、S271、S274、S275、S276、S1142、S合引等12條引物,每

4、種實(shí)蠅用1個(gè)個(gè)體,對(duì)4種實(shí)蠅進(jìn)行擴(kuò)增,根據(jù)DICE遺傳距離聚類(lèi)結(jié)果表明南瓜實(shí)蠅和具條實(shí)蠅先聚在一起,然后與三點(diǎn)棍腹實(shí)蠅聚在一起,最后再與桔大實(shí)蠅聚在一起.用S61、S107、S126、S275、S1142等5條引物,每種實(shí)蠅用3個(gè)個(gè)體,對(duì)4種實(shí)蠅進(jìn)行擴(kuò)增,用DICE和NEI遺傳距離聚類(lèi)結(jié)果表明南瓜實(shí)蠅和具條實(shí)蠅先聚在一起,再與桔大實(shí)蠅聚在一起,最后它們3個(gè)與三點(diǎn)棍腹實(shí)蠅聚在一起.這與傳統(tǒng)分類(lèi)所提出的親緣關(guān)系完全一致.6、通過(guò)擴(kuò)增ITS<

5、,1>片段,成功的對(duì)4種實(shí)蠅進(jìn)行了鑒定,其中南瓜實(shí)蠅擴(kuò)增出的條帶大小為650bp左右,具條實(shí)蠅擴(kuò)增出的條帶大小為640bp左右,桔大實(shí)蠅擴(kuò)增出的條帶大小為1010bp左右,三點(diǎn)棍腹實(shí)蠅擴(kuò)增出的條帶大小為773bp左右,該方法比RAPD方法用的時(shí)間更短,整個(gè)過(guò)程可以在30個(gè)小時(shí)內(nèi)完成,重復(fù)性好,可以在不同實(shí)驗(yàn)室,不同PCR儀上進(jìn)行重復(fù).該論文在國(guó)內(nèi)首次利用兩種分子標(biāo)記對(duì)實(shí)蠅進(jìn)行了鑒定,利用這兩種方法對(duì)實(shí)蠅進(jìn)行鑒定快速、準(zhǔn)確,從理論上來(lái)講,