應(yīng)用細(xì)胞色素氧化酶亞基Ⅰ鑒定蠅科常見嗜尸性蠅種.pdf

1、背景:
　　 法醫(yī)昆蟲學(xué)(Forensic entomology)是法醫(yī)學(xué)和節(jié)肢動(dòng)物科學(xué)在廣泛領(lǐng)域結(jié)合并相互影響的一門新型交叉邊緣性學(xué)科，應(yīng)用范圍上涉及刑事、民事、行政案件，為法醫(yī)實(shí)際檢案提供技術(shù)幫助。主要研究方法是對在尸體內(nèi)、尸體表面或尸體附近采集到的昆蟲標(biāo)本，進(jìn)行檢驗(yàn)、鑒定、分類后，明確昆蟲種類或確定某一昆蟲生長發(fā)育狀態(tài)，結(jié)合該昆蟲在尸體上的生態(tài)群落演替及生活習(xí)性，幫助法醫(yī)完成死亡時(shí)間（postmortem interval

2、，PMI）推斷。在應(yīng)用尸體上昆蟲群落演替規(guī)律解決相關(guān)法醫(yī)學(xué)問題的前提是鑒定昆蟲的種類。
　　 機(jī)體死后不久，就會(huì)有大量嗜尸性蠅類到達(dá)并產(chǎn)卵，因此，測定尸體上嗜尸性蠅類的種類及其蛹的發(fā)育齡期是估計(jì)死亡時(shí)間(PMI)的重要昆蟲學(xué)資料。然而昆蟲種類繁多，只有經(jīng)過專門訓(xùn)練的專業(yè)人員才能掌握某類群的形態(tài)學(xué)鑒別要點(diǎn)。利用形態(tài)學(xué)特征鑒定蠅類的方法不能得到很好的普及，也給法醫(yī)工作者日常實(shí)際檢案帶來很大障礙。
　　 近年發(fā)展起來的分子生物

3、學(xué)技術(shù)便很好的解決了這一難題，本研究通過運(yùn)用自行設(shè)計(jì)的線粒體細(xì)胞色素氧化酶亞基Ⅰ(COⅠ)引物，從基因水平探索昆蟲種類的鑒別。使昆蟲種類鑒定方法更為準(zhǔn)確和科學(xué)。
　　 目的:
　　 應(yīng)用272bp的細(xì)胞色素氧化酶亞基Ⅰ(COⅠ)的基因片段對蠅科常見嗜尸性蠅種進(jìn)行種類鑒定，為建立地區(qū)嗜尸性昆蟲基因庫積累數(shù)據(jù)，為蠅科嗜尸性蠅種在實(shí)踐中進(jìn)行死亡時(shí)間推斷奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 2009-2011年在湖南省

4、及周邊省份應(yīng)用家兔尸體誘捕嗜尸性蠅科成蟲，與本教研室前期(2007-2008)捕獲的嗜尸性蠅科樣本進(jìn)行匯總、挑選，邀請湖南省農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲學(xué)專家對挑選出的樣本進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。利用十六烷基三甲溴化銨(CTAB)法提取樣本DNA，瓊脂糖凝膠電泳檢測提取效果。
　　 Epoendorf梯度PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，PCR膠回收試劑盒純化。純化產(chǎn)物送往華大基因（武漢）進(jìn)行序列測性;MEGA4軟件包進(jìn)行序列分析及構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。
　　 結(jié)果

5、:
　　 通過對DNA COⅠ片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測序的方法，能有效檢測出嗜尸性蠅科樣本的基因序列，利用MEGA4.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。得出與形態(tài)學(xué)鑒定一致的種類，鑒定出4屬5種蠅類的種屬關(guān)系:家蠅屬中家蠅;黑蠅屬中厚環(huán)黑蠅、斑踱黑蠅;腐蠅屬中廄腐蠅;螫蠅屬中廄螫蠅。
　　 結(jié)論:
　　 DNA序列分析具有快速、簡便和精確的特點(diǎn)，是目前分析進(jìn)化及系統(tǒng)發(fā)育研究中有效、可靠的方法，分子鑒定是對形態(tài)學(xué)鑒定方法上的一個(gè)