IMS-PCR檢測番茄細(xì)菌性斑點病種子帶菌研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究在中國農(nóng)科院植保所國家重點實驗室進行,所做的工作在國內(nèi)是首次進行的.采用兩種方法制備得到兩種抗原,分別對應(yīng)兩種注射方法,得到三種血清:抗PST全菌體血清、抗PST2844-87血清和抗PST18血清.用試管凝集法測定了所得血清的效價:抗全菌體血清效價為640,另外兩種血清效價為1280以上.用ELISA檢測所獲抗體的專一性,三種血清的專一性基本相近,抗18血清交叉反應(yīng)最少,抗全菌體血清交叉反應(yīng)在其次,假陽性反應(yīng)最多的是抗87血清.

2、提取了供試74種細(xì)菌的基因組DNA,確定了檢測PST的PCR條件;得到能夠擴增兩個特異基因片段的引物,引物對p1、p2和引物對p3、p4.引物p3、p4擴增的基因特異性較強,可以供檢測用,而引物p1、p2所擴增的基因片段的特異性較弱,可作輔助檢測用.制備得到了具有磁心的瓊脂糖微球載體,保存于4℃.進行了抗血清IgG的粗提.將上述實驗結(jié)果應(yīng)用于種子帶菌檢測.在實驗中設(shè)定不同梯度的人工接菌濃度,其中ELISA的檢出臨界值是1﹪.PCR的檢出

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