IMS-PCR檢測(cè)番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病種子帶菌研究.pdf

1、該研究在中國農(nóng)科院植保所國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行,所做的工作在國內(nèi)是首次進(jìn)行的.采用兩種方法制備得到兩種抗原,分別對(duì)應(yīng)兩種注射方法,得到三種血清:抗PST全菌體血清、抗PST2844-87血清和抗PST18血清.用試管凝集法測(cè)定了所得血清的效價(jià):抗全菌體血清效價(jià)為640,另外兩種血清效價(jià)為1280以上.用ELISA檢測(cè)所獲抗體的專一性,三種血清的專一性基本相近,抗18血清交叉反應(yīng)最少,抗全菌體血清交叉反應(yīng)在其次,假陽性反應(yīng)最多的是抗87血清.

2、提取了供試74種細(xì)菌的基因組DNA,確定了檢測(cè)PST的PCR條件;得到能夠擴(kuò)增兩個(gè)特異基因片段的引物,引物對(duì)p1、p2和引物對(duì)p3、p4.引物p3、p4擴(kuò)增的基因特異性較強(qiáng),可以供檢測(cè)用,而引物p1、p2所擴(kuò)增的基因片段的特異性較弱,可作輔助檢測(cè)用.制備得到了具有磁心的瓊脂糖微球載體,保存于4℃.進(jìn)行了抗血清IgG的粗提.將上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用于種子帶菌檢測(cè).在實(shí)驗(yàn)中設(shè)定不同梯度的人工接菌濃度,其中ELISA的檢出臨界值是1﹪.PCR的檢出