香菇耐高溫菌株的雜交選育.pdf

1、香菇(Lentinula edodes)屬于低溫和變溫結(jié)實(shí)性菇類，自然條件下其菌絲生長(zhǎng)最適溫度為24~27℃，原基分化最適溫度為10~12℃，子實(shí)體發(fā)育最適溫度為8~16℃。為了解決香菇高溫出菇的問(wèn)題，選育香菇耐高溫新菌株是一條根本的途徑。
　　本研究以香菇栽培品種808、L135、武香1號(hào)以及耐高溫誘變菌株P(guān)18N44和P18N33為親本，制備原生質(zhì)體單核體和孢子單核體，并進(jìn)行單單雜交和單雙雜交，試驗(yàn)共設(shè)置雜交組合734對(duì)，通過(guò)

2、顯微鏡鏡檢鎖狀聯(lián)合及與親本的拮抗試驗(yàn)初步獲得413個(gè)雜交子。對(duì)親本進(jìn)行47℃熱激試驗(yàn)，分別熱激1h、2h和3h后再置于25℃觀察菌絲的恢復(fù)生長(zhǎng)情況，結(jié)果表明熱激處理1h和2h的區(qū)分效果不大，熱激3h后親本中P18N44的菌絲恢復(fù)生長(zhǎng)能力最強(qiáng)，菌絲恢復(fù)生長(zhǎng)的時(shí)間為5~7d，因此，以47℃熱激3h后菌絲在PDA培養(yǎng)基上恢復(fù)生長(zhǎng)天數(shù)少于5d為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)雜交子進(jìn)行初篩，結(jié)果表明100個(gè)雜交子的恢復(fù)能力大于親本。為了進(jìn)一步考察菌絲在木屑培養(yǎng)基中的生

3、長(zhǎng)能力，測(cè)定了100個(gè)雜交子與親本在大試管木屑培養(yǎng)基中的恒溫長(zhǎng)速、高溫長(zhǎng)速和恢復(fù)長(zhǎng)速。淘汰2個(gè)不能定植的雜交子，統(tǒng)計(jì)剩余98個(gè)雜交子的長(zhǎng)速?？傮w而言，恒溫長(zhǎng)速高于恢復(fù)長(zhǎng)速，恢復(fù)長(zhǎng)速高于高溫長(zhǎng)速。
　　47℃熱激試驗(yàn)和長(zhǎng)速測(cè)定試驗(yàn)都是在菌絲水平上對(duì)菌株的耐高溫能力進(jìn)行考察，為了考察子實(shí)體耐高溫的情況，對(duì)雜交子和親本進(jìn)行了大試管出菇試驗(yàn)和菌袋出菇試驗(yàn)，出菇溫度設(shè)置為25℃。統(tǒng)計(jì)單菇重量、菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌柄長(zhǎng)度、菌柄直徑、現(xiàn)原基期

4、和單袋產(chǎn)量等農(nóng)藝性狀，并對(duì)各項(xiàng)農(nóng)藝性狀進(jìn)行權(quán)重配比，得到各雜交子的綜合評(píng)分，其中10個(gè)雜交子的綜合性狀較優(yōu)，且出菇期較穩(wěn)定，可以在香菇主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行小范圍試種，進(jìn)一步驗(yàn)證這些雜交子的產(chǎn)量和耐高溫特性。
　　對(duì)農(nóng)藝性狀和長(zhǎng)速進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)高溫長(zhǎng)速快的菌株子實(shí)體較小且菌蓋較薄。恒溫長(zhǎng)速與單菇重量、菌蓋直徑等表征子實(shí)體性狀的指標(biāo)呈正相關(guān)，與單袋產(chǎn)量呈顯著正相關(guān)，說(shuō)明恒溫長(zhǎng)速快的菌株出菇性狀較好，且產(chǎn)量高。恢復(fù)長(zhǎng)速與農(nóng)藝性狀都呈正相關(guān)，

5、說(shuō)明恢復(fù)長(zhǎng)速快，子實(shí)體的農(nóng)藝性狀好。據(jù)此，對(duì)已有的耐高溫香菇菌株的篩選模型進(jìn)行了完善：
　　1）47℃熱激試驗(yàn)初篩，淘汰掉菌絲恢復(fù)能力差的菌株；
　　2）測(cè)定菌株在木屑培養(yǎng)基中的恒溫長(zhǎng)速、高溫長(zhǎng)速以及恢復(fù)長(zhǎng)速，淘汰掉恒溫長(zhǎng)速過(guò)慢、恢復(fù)長(zhǎng)速過(guò)慢以及高溫長(zhǎng)速過(guò)快的菌株。
　　3）栽培出菇試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證菌株出菇時(shí)的耐高溫能力。
　　分別通過(guò)剛果紅染色法和ABTS法測(cè)定了10個(gè)耐高溫雜交子和5個(gè)親本的纖維素酶活性和漆酶活

6、性，雜交子與親本的纖維素酶活性具有顯著性差異，而大部分雜交子的漆酶活性只與親本之一具有顯著性差異。對(duì)纖維素酶活性、漆酶活性和生物轉(zhuǎn)化率進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)漆酶活性與纖維素酶活性都與轉(zhuǎn)化率呈正相關(guān)，但相關(guān)系數(shù)略有差異，說(shuō)明纖維素酶活性和漆酶活性較高的菌株生物轉(zhuǎn)化率較大。為了在分子水平上分析10個(gè)耐高溫雜交子與親本的差異，從31條引物中篩選出9條引物對(duì)雜交子和親本進(jìn)行ISSR-PCR擴(kuò)增，利用軟件NTSYSpc2.10計(jì)算各菌株間的遺傳距離