香菇耐高溫菌株的雜交選育.pdf

1、香菇(Lentinula edodes)屬于低溫和變溫結(jié)實性菇類，自然條件下其菌絲生長最適溫度為24~27℃，原基分化最適溫度為10~12℃，子實體發(fā)育最適溫度為8~16℃。為了解決香菇高溫出菇的問題，選育香菇耐高溫新菌株是一條根本的途徑。
　　本研究以香菇栽培品種808、L135、武香1號以及耐高溫誘變菌株P(guān)18N44和P18N33為親本，制備原生質(zhì)體單核體和孢子單核體，并進行單單雜交和單雙雜交，試驗共設(shè)置雜交組合734對，通過

2、顯微鏡鏡檢鎖狀聯(lián)合及與親本的拮抗試驗初步獲得413個雜交子。對親本進行47℃熱激試驗，分別熱激1h、2h和3h后再置于25℃觀察菌絲的恢復(fù)生長情況，結(jié)果表明熱激處理1h和2h的區(qū)分效果不大，熱激3h后親本中P18N44的菌絲恢復(fù)生長能力最強，菌絲恢復(fù)生長的時間為5~7d，因此，以47℃熱激3h后菌絲在PDA培養(yǎng)基上恢復(fù)生長天數(shù)少于5d為標(biāo)準(zhǔn)，對雜交子進行初篩，結(jié)果表明100個雜交子的恢復(fù)能力大于親本。為了進一步考察菌絲在木屑培養(yǎng)基中的生

3、長能力，測定了100個雜交子與親本在大試管木屑培養(yǎng)基中的恒溫長速、高溫長速和恢復(fù)長速。淘汰2個不能定植的雜交子，統(tǒng)計剩余98個雜交子的長速。總體而言，恒溫長速高于恢復(fù)長速，恢復(fù)長速高于高溫長速。
　　47℃熱激試驗和長速測定試驗都是在菌絲水平上對菌株的耐高溫能力進行考察，為了考察子實體耐高溫的情況，對雜交子和親本進行了大試管出菇試驗和菌袋出菇試驗，出菇溫度設(shè)置為25℃。統(tǒng)計單菇重量、菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌柄長度、菌柄直徑、現(xiàn)原基期

4、和單袋產(chǎn)量等農(nóng)藝性狀，并對各項農(nóng)藝性狀進行權(quán)重配比，得到各雜交子的綜合評分，其中10個雜交子的綜合性狀較優(yōu)，且出菇期較穩(wěn)定，可以在香菇主產(chǎn)區(qū)進行小范圍試種，進一步驗證這些雜交子的產(chǎn)量和耐高溫特性。
　　對農(nóng)藝性狀和長速進行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)高溫長速快的菌株子實體較小且菌蓋較薄。恒溫長速與單菇重量、菌蓋直徑等表征子實體性狀的指標(biāo)呈正相關(guān)，與單袋產(chǎn)量呈顯著正相關(guān)，說明恒溫長速快的菌株出菇性狀較好，且產(chǎn)量高?；謴?fù)長速與農(nóng)藝性狀都呈正相關(guān)，

5、說明恢復(fù)長速快，子實體的農(nóng)藝性狀好。據(jù)此，對已有的耐高溫香菇菌株的篩選模型進行了完善：
　　1）47℃熱激試驗初篩，淘汰掉菌絲恢復(fù)能力差的菌株；
　　2）測定菌株在木屑培養(yǎng)基中的恒溫長速、高溫長速以及恢復(fù)長速，淘汰掉恒溫長速過慢、恢復(fù)長速過慢以及高溫長速過快的菌株。
　　3）栽培出菇試驗進一步驗證菌株出菇時的耐高溫能力。
　　分別通過剛果紅染色法和ABTS法測定了10個耐高溫雜交子和5個親本的纖維素酶活性和漆酶活

6、性，雜交子與親本的纖維素酶活性具有顯著性差異，而大部分雜交子的漆酶活性只與親本之一具有顯著性差異。對纖維素酶活性、漆酶活性和生物轉(zhuǎn)化率進行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)漆酶活性與纖維素酶活性都與轉(zhuǎn)化率呈正相關(guān)，但相關(guān)系數(shù)略有差異，說明纖維素酶活性和漆酶活性較高的菌株生物轉(zhuǎn)化率較大。為了在分子水平上分析10個耐高溫雜交子與親本的差異，從31條引物中篩選出9條引物對雜交子和親本進行ISSR-PCR擴增，利用軟件NTSYSpc2.10計算各菌株間的遺傳距離