蕓芥抗油菜菌核病分子基礎(chǔ)的研究.pdf

1、湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文蕓芥抗油菜菌核病分子基礎(chǔ)的研究姓名：鐘軍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：李栒官春云2003.5.1湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)博士論文蕓芥抗油菜菌核病分子基礎(chǔ)的研究鐘軍中文摘要油菜菌核病是世界范圍的病害，同時它也是中國油菜三大病害之一，嚴(yán)重影響了我國的油菜生產(chǎn)，因此，油菜抗病育種工作日益受到研究者的重視。本試驗在蕓芥抗菌核病分子基礎(chǔ)方面作了一些初步研究，旨在從分子生物學(xué)領(lǐng)域為油菜抗病育種提供科學(xué)依據(jù)。其結(jié)果如下：1

2、本試驗以蕓芥為材料，分別用cTAB法、SDs法、尿素法、NaoH法四種方法對蕓芥基因組DNA進(jìn)行了提??；并用紫外光分光光度計法、瓊脂糖電泳法和RAPD分析法對所提取的DNA進(jìn)行檢測，并對四種方法在DNA的產(chǎn)量、質(zhì)量和耗時、耗費等方面的優(yōu)缺點進(jìn)行了總結(jié)，以便在實際工作中根據(jù)不同的試驗條件選取最佳提取方法。通過四種方法比較后認(rèn)為，尿素法是蕓芥基因組DNA的最佳提取方法。2通過蕓芥總基因組DNA為模板，對RAPD反應(yīng)程序中的重要參數(shù)進(jìn)行摸索和

3、優(yōu)化試驗，建立了隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA分析應(yīng)用反應(yīng)體系，即反應(yīng)體積25ul，模板DNA30～40Ilg，M922ommol／l，dNTPo1mmol／l，隨機(jī)引物o2嘲om，1硇聚合酶1U：反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性3Inin，94℃變性40s，37℃退火1rnin，72℃延伸2miIl，循環(huán)41次。該體系可有效地應(yīng)用在蕓芥遺傳育種研究中，重復(fù)性好，可靠性高。3利用3種常規(guī)菌核病鑒定方法對11個蕓芥品種及對照的抗病性進(jìn)行鑒定；進(jìn)一步根據(jù)擬南

4、芥等植物抗病基因序列，人工合成了8條引物，并從中篩選出了一對引物對11個經(jīng)過常規(guī)鑒定的蕓芥品種進(jìn)行抗性驗證。結(jié)果表明：草酸浸葉法、草酸浸根法、苗期菌絲瓊脂塊接種法3種鑒定結(jié)果差異不顯著；相關(guān)分析表明，三種常規(guī)鑒定法的病情指數(shù)相關(guān)系數(shù)均達(dá)極顯著水平，分別為O929、0950、0966；在PcR擴(kuò)增中，經(jīng)常規(guī)鑒定表現(xiàn)抗病的品種出現(xiàn)了一條290bp大小的特異片斷，而感病品種則沒有出現(xiàn)，這證明了分子檢測的可行性。4利用RAPD技術(shù)，用100個1