蕓芥抗油菜菌核病分子基礎的研究.pdf

1、湖南農業(yè)大學博士學位論文蕓芥抗油菜菌核病分子基礎的研究姓名：鐘軍申請學位級別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導教師：李栒官春云2003.5.1湖南農業(yè)大學博士論文蕓芥抗油菜菌核病分子基礎的研究鐘軍中文摘要油菜菌核病是世界范圍的病害，同時它也是中國油菜三大病害之一，嚴重影響了我國的油菜生產(chǎn)，因此，油菜抗病育種工作日益受到研究者的重視。本試驗在蕓芥抗菌核病分子基礎方面作了一些初步研究，旨在從分子生物學領域為油菜抗病育種提供科學依據(jù)。其結果如下：1

2、本試驗以蕓芥為材料，分別用cTAB法、SDs法、尿素法、NaoH法四種方法對蕓芥基因組DNA進行了提??；并用紫外光分光光度計法、瓊脂糖電泳法和RAPD分析法對所提取的DNA進行檢測，并對四種方法在DNA的產(chǎn)量、質量和耗時、耗費等方面的優(yōu)缺點進行了總結，以便在實際工作中根據(jù)不同的試驗條件選取最佳提取方法。通過四種方法比較后認為，尿素法是蕓芥基因組DNA的最佳提取方法。2通過蕓芥總基因組DNA為模板，對RAPD反應程序中的重要參數(shù)進行摸索和

3、優(yōu)化試驗，建立了隨機擴增多態(tài)性DNA分析應用反應體系，即反應體積25ul，模板DNA30～40Ilg，M922ommol／l，dNTPo1mmol／l，隨機引物o2嘲om，1硇聚合酶1U：反應程序為：94℃預變性3Inin，94℃變性40s，37℃退火1rnin，72℃延伸2miIl，循環(huán)41次。該體系可有效地應用在蕓芥遺傳育種研究中，重復性好，可靠性高。3利用3種常規(guī)菌核病鑒定方法對11個蕓芥品種及對照的抗病性進行鑒定；進一步根據(jù)擬南

4、芥等植物抗病基因序列，人工合成了8條引物，并從中篩選出了一對引物對11個經(jīng)過常規(guī)鑒定的蕓芥品種進行抗性驗證。結果表明：草酸浸葉法、草酸浸根法、苗期菌絲瓊脂塊接種法3種鑒定結果差異不顯著；相關分析表明，三種常規(guī)鑒定法的病情指數(shù)相關系數(shù)均達極顯著水平，分別為O929、0950、0966；在PcR擴增中，經(jīng)常規(guī)鑒定表現(xiàn)抗病的品種出現(xiàn)了一條290bp大小的特異片斷，而感病品種則沒有出現(xiàn)，這證明了分子檢測的可行性。4利用RAPD技術，用100個1