貢菊種苗離體快繁與復壯技術的研究.pdf

1、貢菊Dendranthema morifolium(Ramat.) Tzvel.cv.Gongju又稱黃山貢菊、徽州貢菊，是菊科菊屬多年生草本植物;其根、莖、葉、花均可入藥，具有清肝明目等功效，可用于頭風，目眩，咽喉腫痛，癰腫疔毒等癥。菊花作為原料藥入制中成藥已有多年歷史，且療效確切，市場對其需求與日俱增，如杞菊地黃丸、三寶片、清熱明目茶等。菊在產業(yè)化生產上主要采用扦插和分株等無性繁殖方式，極易受到各種病毒等微生物侵害;在生產中隨著栽培

2、時間的推移，則病害加重，導致植株減產，種質退化，嚴重的直接導致植株死亡;而物理、化學等防治措施對病毒病的防治效果并不顯著。
　　目的：建立貢菊離體快繁體系，對貢菊種質資源進行復壯，保證植株的遺傳穩(wěn)定性;為保證貢菊種質可持續(xù)利用、貢菊優(yōu)質種苗的規(guī)范化(GAP)、產業(yè)化、規(guī)?；a奠定基礎。
　　方法：通過對引種到粵東地區(qū)的改良品種貢菊進行實地調查，分析其種質退化的原因，再采用莖尖離體培養(yǎng)，獲得的組培苗采用熱處理結合莖尖二次培養(yǎng)

3、的方法脫毒，對貢菊種質進行復壯，并以腋芽增殖方式進行繼代培養(yǎng)，建立貢菊離體快繁體系，保證植株的遺傳穩(wěn)定性;試驗主要采用了文獻研究、實地調查、單因素試驗探討、正交設計試驗等方法進行。
　　結果：在查閱了大量與本研究相關的國內外參考文獻資料的基礎上，歸納總結了藥菊種質的研究現(xiàn)狀，內容涵蓋了藥菊的本草考證、生藥學、化學、藥理藥效、臨床應用、生物學、脫毒方法及脫毒鑒定、組織培養(yǎng)研究進展等方面的研究。通過試驗研究，篩選出了初代培養(yǎng)、繼代增殖

4、、壯苗生根、煉苗移栽等階段的最佳培養(yǎng)基及培養(yǎng)技術，優(yōu)化和完善了貢菊組培快繁體系;建立了適用于產業(yè)化生產的貢菊脫毒技術和鑒定方法，可行性強，成本低廉，脫毒效果顯著。
　　結論：⑴無菌苗的獲取:70％酒精和0.1％氯化汞為較適合的消毒溶劑，對于貢菊莖尖外植體，70％酒精消毒45 s后再用0.1％氯化汞消毒3 min的時間配比對其消毒效果較理想;對于貢菊莖節(jié)，70％酒精消毒30 s后再用0.1％氯化汞消毒11 min的滅菌時間配比對其消

5、毒效果較理想。⑵腋芽誘導:以MS作為基礎培養(yǎng)基，植物生長物質以植物細胞分裂素6-BA和生長素NAA的誘導效果較好，MS+6-BA1.5-2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培養(yǎng)基有利于腋芽形成，45 d的增殖倍數(shù)為5.3-5.8，且腋芽生長良好。⑶各添加物對瓶苗生長的影響:在基礎培養(yǎng)基的調整上，大量元素的用量為150mL/L，微量元素的用量為1 mL/L，維生素的用量為1.5 mL/L時能明顯促進組培苗的生長;較為適宜的瓊脂濃度為4

6、 g/L;椰子汁為天然添加物的首選，且在50-200 mL/L的濃度范圍內，組培苗的生長隨著濃度的增長而加快，表現(xiàn)為苗高逐漸增高、莖粗壯、葉濃綠且葉片增大;根據(jù)正交實驗結果，最利于貢菊組培苗壯苗的組合培養(yǎng)基為:1/2MS+蔗糖30 g/L+AC1g/L+NAA0.1 mg/L+IBA0.1 mg/L，其中，蔗糖對貢菊組培苗的壯苗生長影響最大。⑷生根誘導培養(yǎng):培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.05 mg/L+NAA0.05 mg/L適宜組培苗生

7、根;活性炭的添加有利于貢菊組培苗側根系的生長。⑸煉苗程序:組培苗生根誘導培養(yǎng)30天，待組培苗長至五片以上有效葉片，開蓋5天適應環(huán)境鍛煉，水培3天，然后轉至蛭石∶河沙(1∶1)的基質中定植。⑹在脫毒方法上采用了熱處理結合莖尖培養(yǎng)及二次培養(yǎng)的方法;在脫毒鑒定上采用了性狀鑒定和指示植物鑒定兩種方法對所獲得的離體再生苗進行鑒定。未經過脫毒處理的組培苗在長期繼代培養(yǎng)中表現(xiàn)出葉片黃化、黑斑、卷葉、縮頂?shù)劝Y狀，而脫毒苗未表現(xiàn)其相應癥狀，且長勢較好。指