端粒介導的甘藍型油菜人工小染色體的篩選和鑒定.pdf

1、本文以甘藍型油菜（Brassica napus，AACC，2n=38）品種Westar為材料，在中國科學院遺傳與發(fā)育生物學研究所胡贊民研究組油菜人工小染色體研究的基礎上，利用熒光原位雜交和PCR技術等方法進行人工小染色體的鑒定和篩選，使用自交和雜交的方式獲得了具有一對人工小染色體的純合油菜新材料，并對外源基因是否能夠定點整合到油菜小染色體上進行了相關研究，旨在為油菜進一步分子育種及染色體結構與功能的研究提供新的技術途徑和新材料。主要研究

2、結果如下:
　　1.通過對具有截斷的染色體的兩個轉基因株系pWY86-5-73和pWY86-5-75的自交、雜交繼代培養(yǎng)，擴大了轉基因植株庫的量，獲得了具有小染色體且能夠穩(wěn)定遺傳的轉基因株系，并在培養(yǎng)過程中進行了轉基因陽性植株的篩選;
　　2.根據(jù)pWY86-5質粒結構的特點，本文中采用噴灑除草劑和PCR鑒定的方法對每代培育的所有pWY86-5轉基因植株進行了篩選，每代均選取陽性植株繼續(xù)培育，通過對每代植株的逐步篩選得到了實

3、驗預期中的含有一定數(shù)量小染色體的轉基因株系;
　　3.使用pWY96作為探針雜交各代PCR陽性pWY86-5轉基因植株花蕾的染色體，以觀測其中的小染色體，通過熒光原位雜交鑒定，獲得了能夠穩(wěn)定遺傳的、僅具有一對小染色體的純合轉基因植株;
　　4.利用從白菜型油菜（Brassica rapa）的BAC文庫中選出的BAC克隆L17制作探針，將該探針與端粒重復序列探針45S及著絲粒重復序列探針5S同時與發(fā)生了染色體截斷事件的pWY8