熒光標(biāo)記鰱鳙對其鰓和腸道微生物的影響.pdf

1、人工增殖放流是水生生物資源養(yǎng)護(hù)的重要措施，在實(shí)踐過程中取得了良好的生態(tài)經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。在增殖放流過程中，為評估放流效果，需要對放流魚類進(jìn)行標(biāo)記回捕工作，化學(xué)標(biāo)記法是實(shí)現(xiàn)人工飼養(yǎng)魚苗大規(guī)模標(biāo)記的理想方法，其中以熒光物質(zhì)浸泡標(biāo)記魚類耳石應(yīng)用最為廣泛，與其它方法相比，熒光物質(zhì)標(biāo)記操作簡單，成本低，且對生物體的影響較小。本實(shí)驗(yàn)室的前期研究結(jié)果表明，鹽酸四環(huán)素標(biāo)記鰱魚等效果明顯，雖然在短時(shí)間內(nèi)會(huì)對魚體造成一定程度的脅迫，但一段時(shí)間后可以恢復(fù)正常。

2、而且在標(biāo)記過程中發(fā)現(xiàn)，對鰱、鳙進(jìn)行浸泡標(biāo)記后，鰱、鳙存活率較對照組要高，對環(huán)境脅迫的耐受能力增強(qiáng)，其原因可能與鹽酸四環(huán)素的抑菌作用有關(guān)。
　　為闡明鹽酸四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)記對鰱、鳙附著微生物的影響，本研究運(yùn)用分子生物學(xué)方法對經(jīng)鹽酸四環(huán)素浸泡標(biāo)記后的鰱、鳙腸道、鰓附著微生物以及水體環(huán)境中的微生物總基因組DNA進(jìn)行提取，PCR擴(kuò)增16S rRNA基因片段，然后運(yùn)用DGGE方法對樣本DNA片段進(jìn)行分離、克隆、測序，對微生物種類進(jìn)行判別，群落結(jié)

3、構(gòu)進(jìn)行分析，通過比較分析熒光標(biāo)記對放流鰱、鳙的影響，為研究魚類對標(biāo)記脅迫的生理響應(yīng)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　研究結(jié)果表明，熒光標(biāo)記使浸泡水體中微生物種類數(shù)下降，大量藍(lán)細(xì)菌門中的微生物，包括眉藻屬、顫藻屬和聚球藻屬，以及一些α-變形菌綱中生絲微菌屬和紅桿菌屬中的細(xì)菌消失，而新出現(xiàn)了一些β-變形菌綱Malikia和Vogesella中的細(xì)菌;由于水體中菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了巨大的變化，而完全通過鰓絲進(jìn)行濾食的鰱、鳙，附著于其鰓表面的菌群相應(yīng)的也發(fā)生

4、了變化，對照組鰱、鳙鰓表面的優(yōu)勢菌群是變形菌門γ-變形菌綱氣單胞菌屬和假單胞菌屬，而經(jīng)鹽酸四環(huán)素處理后增加了許多厚壁菌門芽孢桿菌綱的細(xì)菌以及嗜甲基菌和產(chǎn)微球莖菌;水體通過鰓濾食后進(jìn)入腸道，相應(yīng)的也引起了腸道菌群的變化，對照組鰱、鳙，特別是鳙魚腸道中含有大量γ-變形菌綱中假交替單胞菌屬、發(fā)光桿菌屬以及弧菌屬的細(xì)菌，而經(jīng)鹽酸四環(huán)素處理后，這些菌群都消失了，僅保留了一些大腸桿菌和著色菌目以及氣單胞菌屬中的細(xì)菌。由此可見，熒光標(biāo)記物鹽酸四環(huán)素作

5、為一種抗生素，會(huì)大量殺死水體中的各種細(xì)菌，產(chǎn)生抑菌效果，而生活于水中的魚，通過攝食等作用，與水環(huán)境緊密聯(lián)系，所以其鰓上和腸道中的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)也相應(yīng)的發(fā)生了改變。
　　研究結(jié)果顯示，鰱和鳙兩種魚之間的腸道和鰓微生物群落結(jié)構(gòu)也存在一定的差異，其原因復(fù)雜，可能是由于它們的種屬差異和食性不同所導(dǎo)致，也可能與魚體和微生物互作有關(guān)，原因有待研究。
　　在標(biāo)記過程中魚體受到外界環(huán)境脅迫，產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，魚體內(nèi)會(huì)發(fā)生一系列生理生化反應(yīng)，這種脅

6、迫應(yīng)激持續(xù)時(shí)間較長，因此會(huì)導(dǎo)致魚體免疫力降低，對各類病原菌敏感性升高，存活率下降。但是經(jīng)鹽酸四環(huán)素浸泡標(biāo)記后的魚體存活率有所升高，鹽酸四環(huán)素作為一種廣譜性抗生素，有效抑制了部分條件致病菌的生長和繁殖，如水中的氣單胞菌，鰓上的假單胞菌和氣單胞菌，以及腸道中的弧菌等。因此，鹽酸四環(huán)素浸泡標(biāo)記除了可以對魚類耳石進(jìn)行熒光標(biāo)記外，還能控制水體和魚體中部分條件致病菌所致的疾病爆發(fā)，減少這些病原菌對魚體的侵害，使處于脅迫應(yīng)激狀態(tài)的放流魚體存活率提高。