磷脂脂肪酸(PLFA)鑒定系統(tǒng)的功能拓展研究.pdf

1、磷脂脂肪酸(Phospholipid fatty acids，PLFA)是活體生物細胞膜磷脂的重要成分，由于不同類群微生物能通過相應生化途徑形成特定的PLFA，使部分PLFA總是出現(xiàn)在同一類群的微生物中。因此PLFA具有較高的結構多樣性和生物學特異性，可作為區(qū)分活體微生物群落生物標記的基礎，也成為微生物分類的主要依據(jù)。
　　本文以磷脂脂肪酸(PLFA)技術作為切入點，以Sherlock MIS系統(tǒng)的功能拓展和譜圖數(shù)據(jù)分析為主線，探

2、討了PLFA的提取方法、分析方法及數(shù)據(jù)處理模型，比較了土壤和凋落物中微生物群落結構間的作用關系，得到以下結果:
　　(1)建立并優(yōu)化了超聲提取土壤中PLFA的方法，與傳統(tǒng)振蕩提取法對比，發(fā)現(xiàn)利用超聲提取可大幅提高PLFA方法的提取效率，解決了大批量樣品分析PLFA的前處理問題。
　　(2)選取超聲溫度、超聲時間、提取劑量作為PLFA提取的主要影響因素，以PLFA的提取率為響應值，結合響應面法進一步優(yōu)化PLFA的提取工藝。

3、r>　　(3)采用四川茂縣森林土壤和凋落物為研究對象，以PLFA作為特定微生物指示劑進行微生物群落的劃分，利用主成分分析檢測土壤和凋落物中微生物類群間的相互作用關系。結果表明土壤和凋落物中微生物群落的整體差異并不大，但好氧菌與革蘭氏陰性菌更偏愛土壤，而其他類群的微生物則更傾向于凋落物。同時利用主成分分析檢測各實驗條件對微生物群落結構的影響，結果表明:超聲對原生動物、好氧菌等微生物類群的提取有一定影響，但相對于整個微生物群落結構的影響不大

4、，其他實驗條件對微生物菌群的影響較小。
　　(4)以一定濃度的C19做內標，進樣量分別取60、100、120、200、240ul進行分析測試，表明內標進樣量對磷脂脂肪酸微生物測定結果有直接影響;通過對未知樣品的評估，確定了內標進樣量的參考范圍，減少了內標進樣量對實驗結果帶來的誤差。
　　(5)比較了目前常用的兩種數(shù)據(jù)處理方法對數(shù)據(jù)處理結果的影響，得出了最佳處理方法后再結合儀器自身的特點對該處理方法進行改進，并在此基礎上依托P