南海微藻的分離、鑒定及脂肪酸特性分析.pdf

1、隨著全球經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，能源危機(jī)和環(huán)境危機(jī)也日益嚴(yán)重。微藻光合效率高、生長(zhǎng)速度快、含油量高，已被公認(rèn)為生產(chǎn)生物柴油的優(yōu)質(zhì)原料。然而，微藻的生物多樣性高，目前已有3萬(wàn)株微藻被報(bào)道，如何從這個(gè)龐大的體系中篩選出適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)生物柴油的優(yōu)質(zhì)藻種，成為進(jìn)行其他研究方向的基礎(chǔ)。中國(guó)四季分布明顯，我們必須尋找適當(dāng)?shù)脑宸N，來(lái)適應(yīng)不同的生長(zhǎng)溫度，以實(shí)現(xiàn)微藻生物柴油原料的穩(wěn)定供應(yīng)。南海生物多樣性高，多為暖水種，從南海海域采集微藻樣品進(jìn)行分離純化，以期得到

2、一株含脂量高，生長(zhǎng)速度快，耐受高溫的能源微藻，從而實(shí)現(xiàn)微藻生產(chǎn)生物柴油的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
　　1、通過(guò)微吸管分離法對(duì)南海的樣品進(jìn)行分離純化，共得到純化微藻12株。對(duì)純種藻株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，用新型快速植物基因組DNA提取試劑盒提取總DNA，用PCR技術(shù)擴(kuò)增其18S rDNA，對(duì)序列進(jìn)行測(cè)序，在CNBI進(jìn)行序列比對(duì)分析，從而實(shí)現(xiàn)分子生物學(xué)的鑒定，同時(shí)結(jié)合光學(xué)顯微鏡、掃描電鏡和透射電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析，鑒定出所分離12株藻株，通過(guò)分子生物學(xué)和形

3、態(tài)學(xué)鑒定相結(jié)合的方法，大大增加了微藻鑒定的準(zhǔn)確性。
　　2、對(duì)南海中分離純化的12株微藻進(jìn)行總脂含量、生物量及脂肪酸組成進(jìn)行分析。由生長(zhǎng)曲線可知，這12株微藻全部長(zhǎng)勢(shì)良好。通過(guò)甲醇-氯仿(2∶1)重量法對(duì)12株微藻中的總脂含量進(jìn)行測(cè)定，其中含油量最高的微藻是梅尼小環(huán)藻（Cyclotella meneghiniana），總脂含量為39.95％，生物量為2.8535g/L，最終獲得生物量最大的微藻為微擬球藻（Nannochlorops

4、is salina），總脂含量為23.46％，生物量為4.3969 g/L。兩株微藻生長(zhǎng)速度快，含油量高，是生產(chǎn)微藻生物柴油的優(yōu)良藻種。將從微藻提取的粗油脂經(jīng)過(guò)甲酯化反應(yīng)后，通過(guò)氣相色譜技術(shù)，對(duì)其脂肪酸組分進(jìn)行分析，所有微藻內(nèi)長(zhǎng)鏈（14C以上）脂肪酸占總脂含量均在80％以上。結(jié)果表明，不同門(mén)類(lèi)的徽藻中脂肪酸組成差異較大。金藻中主要脂肪酸種類(lèi)為:C18:1、C14:0、C18:3和C16:0，DHA含量為8.19％;綠藻中C16:0、C1

5、6:1、C18:1含量較高，其他種類(lèi)脂肪酸分布較分散，含量較低;硅藻中C14:0、C16:0、C16:1、C22:4含量較高，脂肪酸種類(lèi)比較集中，除繭形藻外都含少量DHA。
　　3、通過(guò)單因子實(shí)驗(yàn)探討了溫度、光照、營(yíng)養(yǎng)鹽濃度對(duì)梅尼小環(huán)藻（Cyclotellameneghiniana）生長(zhǎng)及油脂積累的影響，同時(shí)建立了通過(guò)BODIPY染色快速測(cè)定微藻內(nèi)粗油脂含量的方法。由實(shí)驗(yàn)可知，梅尼小環(huán)藻（在接種10d左右達(dá)到平臺(tái)期，生長(zhǎng)周期較短，