沙蔥多糖對綿羊外周血淋巴細胞免疫功能的影響及其相關機制.pdf

1、天然植物多糖具有多方面的生物學活性，它對機體免疫功能調(diào)節(jié)、細胞與細胞識別和細胞間物質的運輸?shù)确矫婢l(fā)揮著重要作用，并對機體正常細胞沒有毒副作用，有可能成為理想的抗生素替代品。沙蔥（Allium mongolicum Regel）是一種生長在內(nèi)蒙古草原上量大且羊喜食的優(yōu)質牧草，沙蔥多糖是沙蔥的主要活性成分之一，目前對于沙蔥多糖對機體免疫功能的影響已有初步了解，但其免疫作用機制尚不明確。
　　本研究通過改進傳統(tǒng)的梯度密度離心的方法，對

2、抗凝全血進行預離心，在體外成功分離培養(yǎng)出綿羊外周血淋巴細胞，并用流式細胞技術對其表面標志進行了檢測。將不同濃度（50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、250μg/mL）沙蔥多糖作用于體外培養(yǎng)的綿羊外周血淋巴細胞，分別用 MTT法和流式細胞術檢測沙蔥多糖對細胞增殖與細胞周期的影響；用放射免疫分析法檢測不同濃度沙蔥多糖于不同作用時間點（12 h、24 h、48 h、72 h）對淋巴細胞分泌 IL-2、IL-4

3、、IFN-γ與 STAT1的影響；同時，以β-actin為內(nèi)參，用 RT-PCR方法檢測沙蔥多糖對綿羊外周血淋巴細胞IL-2、IL-4、IFN-γ及 STAT1 mRNA表達的影響；并檢測沙蔥多糖對綿羊外周血淋巴細胞 Ca2＋、NO與 iNOS、cAMP與 cGMP含量及其比值的影響；以期為沙蔥多糖的免疫機制研究提供參考。
　　結果表明，沙蔥多糖作用持續(xù)48 h時對淋巴細胞周期中的G1與G2期兩個檢驗點均有抑制作用，表明在這兩個檢

4、驗點上抑制了淋巴細胞增殖；放射免疫分析法檢測綿羊外周血淋巴細胞IL-2、IL-4、IFN-γ與STAT1的含量后發(fā)現(xiàn)，不同濃度的沙蔥多糖對綿羊外周血淋巴細胞分泌IL-2、IL-4、IFN-γ及STAT1在不同作用時間點均有一定程度的促進作用，其中沙蔥多糖持續(xù)作用48 h，濃度為250μg/mL時IL-2的分泌量最高；持續(xù)24 h，100μg/mL時IL-4與IFN-γ的分泌量最高；持續(xù)12 h，100μg/mL時STAT1的分泌量最高；

5、RT-PCR結果顯示，在體外培養(yǎng)綿羊外周血淋巴細胞中能夠成功擴增出內(nèi)參基因(β-actin)和目的基因（IL-2、IL-4、IFN-γ及STAT1），目的基因經(jīng)系統(tǒng)進化樹分析后確定擴增出的目的基因為綿羊屬基因，為后續(xù)試驗奠定了基礎；不同濃度的沙蔥多糖作用體外培養(yǎng)的綿羊外周血淋巴細胞，于不同持續(xù)時間點提取細胞總RNA，以β-actin為內(nèi)參等量擴增目的基因后發(fā)現(xiàn)，沙蔥多糖對目的基因mRNA的表達均呈促進作用，并成一定的正量效關系。在沙蔥多

6、糖對綿羊外周血淋巴細胞相關信號分子生成的研究中發(fā)現(xiàn)，較高劑量的沙蔥多糖可顯著提高綿羊外周血淋巴細胞鈣離子濃度，促進外周血淋巴細胞生成NO，并提高iNOS活性，且均在沙蔥多糖濃度為250μg/mL時Ca2＋與NO含量及iNOS活性達到最高；此外，沙蔥多糖持續(xù)作用3 h時，隨著沙蔥多糖濃度的升高，cAMP與cGMP水平呈下降趨勢，其比值變化無規(guī)律；作用持續(xù)6 h時， cAMP與cGMP水平變化無規(guī)律，但其比值與3 h相比有下降趨勢；作用持續(xù)