胸腺基質淋巴細胞生成素對血小板功能的影響及其機制研究.pdf

1、本文分三個部分進行探討：
　　第一部分：胸腺基質淋巴細胞生成素受體在血小板的表達
　　目的：觀察人和小鼠血小板是否表達胸腺基質淋巴細胞生成素受體(TSLPR)。
　　方法：制備人洗滌血小板和10周齡野生型C57BL/6小鼠洗滌血小板，采用Western blot和流式細胞術檢測血小板表面胸腺基質淋巴細胞生成素受體的表達，樹突細胞作為陽性對照。
　　結果：人及小鼠血小板均表達胸腺基質淋巴細胞生成素受體。
　　

2、結論：TSLPR在人及小鼠血小板表面表達，胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）作為炎性細胞因子是否直接或間接參與血小板粘附、聚集等功能，TS LP/TS LPR通路是否對血小板功能及血栓的形成有影響值得進一步深入研究。
　　第二部分：胸腺基質淋巴細胞生成素對血小板功能的影響
　　目的：研究胸腺基質淋巴細胞生成素（TSLP）對血小板功能的影響
　　方法：制備人洗滌血小板，給予TSLP進行刺激。采用血小板熒光-聚集分析儀檢測

3、TSLP對血小板聚集功能及血小板三磷酸腺苷（ATP）釋放反應的影響；采用流式細胞術檢測血小板膜糖蛋白P選擇素、GpⅡb/Ⅲa（PAC-1）的表達。
　　結果：TSLP單獨刺激引起微弱的血小板聚集及ATP釋放，明顯低于二磷酸腺苷（ADP）、凝血酶誘導的血小板聚集及ATP釋放；TS LP刺激明顯放大ADP、凝血酶誘導的血小板聚集。TS LP單獨刺激引起血小板P選擇素、GpⅡb/Ⅲa的少量表達；TSLP刺激明顯增強ADP、凝血酶誘導的P

4、選擇素、PAC-1的表達。
　　結論：TSLP可通過與TSLP R結合促進血小板活化，TS LP/TS LPR可能與血小板激動劑以共刺激形式增強血小板激活。
　　第三部分：胸腺基質淋巴細胞生成素受體敲除對血小板功能及血栓形成的影響
　　目的：研究胸腺基質淋巴細胞生成素受體(TSLP R)敲除對血小板功能及血栓形成的影響和可能作用機制
　　方法：制備野生型C57BL/6小鼠及TSLP R敲除（TS LP R-/-）

5、C57BL/6小鼠洗滌血小板，給予TS LP進行刺激，采用血小板熒光-聚集分析儀檢測TSLP R缺陷對凝血酶誘導的血小板聚集及釋放功能影響；采用流式細胞術檢測TSLP R缺陷對血小板P選擇素、GpⅡb/Ⅲa表達的影響；采用流動小室分析在高、低剪切力情況下TS LPR缺陷對血小板聚集及血栓形成的影響；采用微型多普勒血流探測器檢測TS LPR缺陷對三氯化鐵誘導的小鼠頸動脈損傷血栓模型血栓形成的影響；采用Western blot檢測，分析PI

6、3K/Akt信號通路在TSLP誘導的血小板激活中作用及TSLPR缺陷對TSLP誘導的血小板Akt磷酸化影響。
　　結果：與野生型對照組比較，TSLPR基因敲除小鼠的血小板聚集及釋放明顯減少；在高、低低剪切力情況下TS LPR基因敲除小鼠的血栓形成明顯減少；TSLP刺激縮短血栓模型小鼠頸動脈血管阻塞時間，TS LPR基因敲除血栓模型小鼠血管阻塞時間明顯延長；TSLP刺激明顯增加人血小板Akt磷酸化，加入PI3K通道阻滯劑(wortm

7、annin、LY294002)后明顯降低TS LP誘導的血小板P選擇素、GpⅡb/Ⅲa表達及血小板Akt磷酸化；與野生型對照組比較，TSLP R基因敲除小鼠血小板Akt磷酸化明顯下降，血小板P選擇素、GpⅡb/Ⅲa表達明顯下降。
　　結論：胸腺基質淋巴細胞生成素受體(TS LP R)敲除導致TSLP誘導的血小板聚集、釋放功能受損；TS LPR缺陷使TS LP誘導的血栓形成受損；TS LP/TS LPR通過PI3K/Akt信號通路促