非Piezo依賴的小鼠顯微授精新技術(shù)改良及其應(yīng)用研究.pdf

1、小鼠的繁殖周期短，遺傳信息豐富，其卵子、胚胎易于獲得和培養(yǎng)，是進行ICSI研究的理想動物模型。但小鼠的Piezo-ICSI技術(shù)與人類卵子的ICSI技術(shù)在操作溫度、破膜原理等方面存在較大差異，不能夠很好地模擬人類卵子的ICSI操作。前期研究通過改良顯微持卵針建立了一種非Piezo依賴的小鼠ICSI技術(shù)(New-ICSI，N-ICSI)，在保證高存活率(83％)的前提下最大程度地貼近了人類的ICSI操作。然而該技術(shù)與Piezo-ICSI相比

2、其卵子存活率和囊胚發(fā)育率還不是非常理想，尚待進一步的優(yōu)化。本研究將原N-ICSI的穿刺破膜的操作分割成淺吸持淺穿刺和深吸持深穿刺兩步后顯著提高了該技術(shù)的卵子存活率(92.5％ V.S.81.1％，p＜0.01)，其操作效率也顯著提高（18.9枚/小時V.S.15.6枚/小時，p＜0.01）。本研究為小鼠非Piezo依賴的ICSI操作方法的應(yīng)用和推廣奠定了堅實基礎(chǔ)，為人類ICSI技術(shù)安全性的動物模型研究（如精子弱激活力模型研究等）提供了更

3、便捷高效的途徑。
　　 在人類臨床應(yīng)用中有2％～3％的ICSI周期完全受精失敗，其主要原因在于卵子未能被激活。人工輔助激活可幫助低或無激活能力的精子或卵子激活，提高受精率，在臨床應(yīng)用中逐漸得到了推廣。然而由于缺乏合適的研究模型，目前還罕有精子激活力的影響因素、激活力降低的機理、輔助激活的安全性等方面的相關(guān)研究。本研究通過將精子脫尾處理后于4℃或37℃預孵育一定時長(0h、2h、4h、8h、12h)探討分析了使精子激活力降低的因素

4、，通過對顯微授精后雙原核形成率及卵裂率等指標的觀察來判斷精子激活力的減弱程度，以期建立精子激活力減弱程度可控的新技術(shù)。結(jié)果表明:精子脫尾處理后于4℃預孵4h后其正常受精率與對照組相比略有下降但無統(tǒng)計學差異(74.6％ V.S.81.5％，p＞0.05)，而于37℃下預孵4h后則顯著下降(35.3％VS.81.5％，p＜0.05)。精子脫尾處理后隨著在37℃下預孵時長的增加，其正常受精率呈逐漸下降的趨勢。預孵時長達到2h、4h時與對照組相

5、比正常受精率已受到顯著影響(56.0％、42.7％ V.S.82.7％，p＜0.05)，達到8h、12h后則進一步顯著下降(p＜0.05)，分別為25.3％、13.5％.此外，脫尾的精子在37℃預孵育的時長超過2小時后，盡管其保持了DNA的完整性但胚胎發(fā)育仍受到了顯著的影響。通過人工輔助激活處理脫尾后37℃預孵4h處理組的合子，可使其正常受精率和囊胚率恢復至接近對照組水平(74.6％ V.S.84.2％，42.0％ V.S.48.2％，