球孢白僵菌氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶(Bbaph)與ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(BbT1)的功能分析.pdf

1、球孢白僵菌(Beauveriabassiana)作為一種經(jīng)典的昆蟲病原真菌，在害蟲防治中應(yīng)用廣泛。其抗逆分子機(jī)理直接關(guān)系到生防制劑的田間防效，科學(xué)與實(shí)踐意義重大。本研究開展了對?；?輔酶A脫氫酶APH結(jié)構(gòu)域即氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶Bbaph的功能分析，并對兩種昆蟲病原真菌中結(jié)構(gòu)相似的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白進(jìn)行功能分析。主要結(jié)果如下:
　　 球孢白僵首Bbaph基因的功能球孢白僵菌氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶Bbaph的全長1226bp，含2個外顯子和

2、3個內(nèi)含子，編碼366個氨基酸。由Bb2860野生株構(gòu)建敲除株ΔBbaph和回補(bǔ)株ΔBbaph/Bbaph，進(jìn)行表型分析。與野生株和回補(bǔ)株相比，△Bbaph產(chǎn)孢量、耐45℃熱脅迫的能力、耐UV-B紫外輻射的能力以及對斜紋夜蛾(Spodopteralitura)二齡幼蟲的毒力分別下降92％、37％、27％及21％。敲除株對15～45mM過氧化氫和2～3mM甲萘醌氧化脅迫的抵抗力上升18％～50％，對多菌靈、三環(huán)唑、申嗪霉素、嘧菌酯、菌核凈

3、等不同類型的化學(xué)藥物的抗性下降10％～68％。除半乳糖之外，多種碳源和無機(jī)氮源都促進(jìn)敲除株生長，而有機(jī)氮源則抑制其生長。野生株與回補(bǔ)株之間無任何表型差異。由此說明，Bbaph基因參與調(diào)控球孢白僵菌的產(chǎn)孢、生長及多脅迫抗性。
　　 兩種昆蟲病原真菌中結(jié)構(gòu)相似ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能比較球孢白僵菌和玫煙色棒束孢(Isariafumosorosea)均存在一種結(jié)構(gòu)相似的ATP結(jié)合匣即ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，分別記為BbT1和IfT1。為了比較這一

4、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在兩種真菌中的的生物學(xué)功能，由Bb2860野生株構(gòu)建BbT1的敲除株和回補(bǔ)株，并將IfT1在BbT1敲除株中異源重組表達(dá)，然后測定各菌株的表型。與野生株、回補(bǔ)株及異源重組株相比，敲除株對20～40mM過氧化氫和2～8mM甲萘醌氧化脅迫的抵抗力下降27％～2.1倍，對多菌靈、伊曲康唑、菌核凈、放線菌酮、乙嘧酚和4-硝基喹啉N-氧化物等不同類型化學(xué)藥物的抗藥性下降28％～4.7倍，對斜紋夜蛾二齡幼蟲的毒力下降20％左右，而野生株、回