三角褐指藻生物學(xué)特性比較研究及轉(zhuǎn)基因初步探索.pdf

1、三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)是一種海洋真核單細(xì)胞硅藻，是海洋生態(tài)系統(tǒng)中一種非常重要的初級(jí)生產(chǎn)者。三角褐指藻總脂含量很高，是一種很有潛力的能源微藻。三角褐指藻來(lái)源廣泛，形態(tài)多樣，不同生境來(lái)源的藻株其生長(zhǎng)狀態(tài)和生理特性不盡相同，即使將其培養(yǎng)在相同的環(huán)境中，生長(zhǎng)狀態(tài)和生理特性也會(huì)存在差異。三角褐指藻富含多種有價(jià)值的不飽和脂肪酸，通過(guò)基因工程的手段可以進(jìn)一步提高它們的含量。Δ6-去飽和酶是脂肪酸合成過(guò)程中的關(guān)

2、建酶。本論文以三角褐指藻為研究對(duì)象，對(duì)不同藻株的形態(tài)特征及生物學(xué)特性進(jìn)行了比較研究，并對(duì)其中一株藻進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因的初步探索，轉(zhuǎn)基因的對(duì)象是Δ6-去飽和酶基因。
　　本實(shí)驗(yàn)由兩部分組成。
　　第一部分:10株不同來(lái)源三角褐指藻生物學(xué)特性的比較研究。對(duì)選取的10株藻進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和分子鑒定，并繪制了它們的生長(zhǎng)曲線，測(cè)定了它們的生長(zhǎng)速率和總脂含量。結(jié)果表明：10株藻在顯微鏡下都呈梭形或卵圓形，黃褐色，將rbcL序列進(jìn)行對(duì)比，這10株藻

3、的rbcL序列幾乎完全相同，它們的生長(zhǎng)曲線、生長(zhǎng)速率和總脂含量有所差異，有些藻株之間的差異顯著。
　　第二部分:三角褐指藻轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)的初步研究。首先，從三角褐指藻中克隆得到Δ6脂肪酸去飽和酶基因，在釀酒酵母真核表達(dá)體系中對(duì)其功能進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示，該基因所編碼的蛋白質(zhì)能夠?qū)A和ALA分別轉(zhuǎn)化為GLA和SDA，說(shuō)明克隆得到的基因即為Δ6-脂肪酸去飽和酶基因；然后成功構(gòu)建了表達(dá)質(zhì)粒pPhaD6，并用基因槍法將其轉(zhuǎn)入三角褐指藻，獲得了