新型抗菌蛋白E12對水稻白葉枯病原菌的抑菌作用研究.pdf

1、水稻白葉枯病是嚴(yán)重影響水稻產(chǎn)量的三大病害之一。推廣抗病品種和使用農(nóng)藥是防治白葉枯病的主要技術(shù)措施。但是，有效抗白葉枯病基因資源的缺乏和白葉枯病原菌抗藥性的增強對水稻的生產(chǎn)造成嚴(yán)重的危害。因此，尋找新的抗病基因和開發(fā)新型農(nóng)藥對進一步防止水稻白葉枯病具有重要意義。
　　抗菌類多肽由于其殺菌作用機制獨特，有望成為新一代“抗菌素”。新型抗菌蛋白E12對包括大腸桿菌TOPO10和銅綠假單胞菌P.aeruginosa PAO1在內(nèi)的多種細菌都

2、有良好的殺菌效果。為了研究E12抗菌蛋白對水稻黃單胞桿菌的殺菌效果，我們通過E12基因在水稻黃單胞桿菌體內(nèi)表達來觀察其對黃單胞桿菌的抑菌效果，通過E12轉(zhuǎn)基因水稻接種實驗來驗證E12對黃單胞桿菌的體外抑菌效果，并嘗試采用原核表達系統(tǒng)表達和純化E12蛋白。主要實驗結(jié)果如下:
　　1.采用原核表達系統(tǒng)，將E12基因克隆進原核表達載體pGEX-6P-1，構(gòu)建GST-E12融合表達載體，轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21，經(jīng)IPTG低溫誘導(dǎo)表達產(chǎn)生GS

3、T-E12融合蛋白，并通過GST親和層析純化GST-E12蛋白，SDS-PAGE和Westernblotting結(jié)果證實，GST-E12融合蛋白能在大腸桿菌原核表達系統(tǒng)中正確表達。
　　2.將E12基因克隆至粘粒表達載體pHM1-30T，轉(zhuǎn)化水稻黃單胞桿菌R6，獲得帶有E12基因的黃單胞桿菌克隆R6/E12。生長曲線和CFU點板試驗表明，R6/E12菌株與對照菌株R6/30T（帶有pHM1-30T質(zhì)粒）相比，繁殖速度變慢，生長明顯