植物乳桿菌粘附特性及對(duì)病原菌粘附的抑制作用研究.pdf

1、益生菌對(duì)腸黏膜的粘附是其發(fā)揮生物屏障、營(yíng)養(yǎng)、免疫、抗腫瘤等生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。因此研究益生菌的粘附作用對(duì)開發(fā)高效、安全的微生態(tài)制劑提供了必要的理論依據(jù)和技術(shù)支持。 本試驗(yàn)以植物乳桿菌為研究對(duì)象，首先采用鹽凝聚法(SAT)和微生物粘著碳羥化合物法(MATH)測(cè)定了4株乳酸菌(植物乳桿菌、糞腸球菌、乳酸乳球菌、干酪乳桿菌)的表面疏水性，作為細(xì)菌粘附力高低的初篩指標(biāo)。結(jié)果顯示，兩種方法測(cè)定均是植物乳桿菌的疏水性最高，SAT測(cè)定時(shí)植物乳桿

2、菌在0.1mol/L．的(NH<,4>)<,2>SO<,4>中凝聚，為高疏水性細(xì)菌；MATH測(cè)定疏水性H％達(dá)到35.34±3.00。隨后采用革蘭氏染色法檢測(cè)了這4株菌對(duì)體外培養(yǎng)的上皮細(xì)胞Caeo-2細(xì)胞的粘附，植物乳桿菌的粘附力最強(qiáng)，達(dá)9.6±0.02CFU/細(xì)胞，所以細(xì)菌表面疏水性可以作為細(xì)菌粘附力的初篩指標(biāo)。 在此基礎(chǔ)上我們研究了不同濃度、時(shí)間、滅活方法和生化試劑處理對(duì)植物乳桿菌粘附力的影響。植物乳桿菌對(duì)Caeo-2細(xì)胞的粘

3、附有明顯的濃度和時(shí)間依賴性，粘附2h后達(dá)到飽和； 100℃水浴10min滅活和紫外照射30min滅活后植物乳桿菌仍能很強(qiáng)的粘附于Caco-2細(xì)胞表面，但植物乳桿菌菌液經(jīng)胰蛋白酶、高碘酸鈉處理以及菌體用磷酸緩沖液(PBS)懸浮后粘附數(shù)急劇降低(p<0.01)。說(shuō)明其粘附素極有可能是糖蛋白類物質(zhì)，存在于細(xì)菌表面及其耗盡培養(yǎng)上清中，且對(duì)熱和紫外線不敏感。胰蛋白酶漂洗細(xì)胞也極顯著降低了該菌對(duì)Caco-2細(xì)胞的粘附(p<0.01)，但高碘酸鈉漂洗

4、細(xì)胞對(duì)該菌的粘附影響不顯著(p>0.05)，揭示細(xì)胞上的粘附素受體可能是蛋白質(zhì)，但葡萄糖、乳糖、果糖、甘露糖均極顯著降低植物乳桿菌對(duì)細(xì)胞的粘附，其中又以甘露糖最為顯著，表明Caeo-2細(xì)胞上的粘附素受體可能含有這四種糖相似的結(jié)構(gòu)，所以細(xì)胞上粘附素受體還有待進(jìn)一步研究。 作為益生菌須對(duì)病原菌有抑制作用，我們研究了不同處理的植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌粘附的抑制作用。植物乳桿菌發(fā)酵液、耗盡培養(yǎng)上清液、100℃水浴10min滅活、紫

5、外照射30min滅活的植物乳桿菌發(fā)酵液和磷酸緩沖液(PBS)懸浮的植物乳桿菌菌體對(duì)大腸桿菌粘附Caco-2細(xì)胞的抑制率分別為71.2％、69.2％、65.2％、70.6％、37.2％；對(duì)沙門氏菌粘附的抑制率分別為90.9％、91.4％、95.1％、91.8％、88.4％，而和植物乳桿菌發(fā)酵液相同pH的醋酸和乳酸混合液對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌的抑制率僅分別為22.3％和24.1％。由此可知無(wú)論是存活還是死亡的植物乳桿菌均能極顯著(p<0.01