恩諾沙星聯(lián)合LPS致雞肝損傷模型的建立及復(fù)方甘草酸單胺粉保護(hù)機(jī)理研究.pdf

1、家禽細(xì)菌感染性疾病防治中常需使用抗菌藥物，而殺菌型抗菌藥往往誘導(dǎo)革蘭氏陰性菌釋放內(nèi)毒素。內(nèi)毒素、抗菌藥物均可誘發(fā)肝損傷，二者共同刺激致肝損傷的病理演變及護(hù)肝藥保護(hù)作用與機(jī)理亟待探明。本研究首先建立恩諾沙星與內(nèi)毒素聯(lián)合誘發(fā)雞肝損傷模型，并藉此研究其病理發(fā)生發(fā)展及復(fù)方甘草酸單胺可溶性粉的保護(hù)作用及機(jī)理。具體內(nèi)容如下:
　　 1.恩諾沙星聯(lián)合LPS誘導(dǎo)新型雞肝損傷模型的建立
　　 1.1 恩諾沙星、LPS致肝損傷劑量的篩選海藍(lán)

2、蛋雞分為恩諾沙星組(EⅠ～ VⅡ，n=10)分別以50，80，100，200，300，400，500mg/kg灌服，1次/d，連續(xù)3天;LPS組(LⅠ～Ⅶ，n=10)分別以1，2，4，6，8，10，15ml/kg腹注脂多糖粗提液(LPS)一次;空白組(n=10)以生理鹽水代藥物處理。給藥后48h觀察雞精神狀態(tài)、存活率，血清ALT、AST水平及肝組織病理學(xué)變化。結(jié)果，EⅣ～Ⅶ和LⅤ～Ⅶ組雞出現(xiàn)死亡，EⅢ和LⅡ～Ⅳ組雞精神不好，ALT、AS

3、T水平上升明顯，EⅢ組肝細(xì)胞廣泛腫大，部分壞死，LⅡ～Ⅳ組肝細(xì)胞壞死、胞漿空泡和炎性浸潤明顯，EⅠ、EⅡ和LⅠ組指標(biāo)變化不及其他組明顯，確定恩諾沙星劑量100mg/kg，LPS初篩劑量為2，4，6ml/kg。
　　 1.2 恩諾沙星聯(lián)合LPS致雞肝損傷模型建立方法的確定連續(xù)3天灌服恩諾沙星（100mg/kg，1次/d），第三天ELⅠ～Ⅲ組灌胃同時(shí)按2，4，6ml/kg劑量腹腔注射LPS觀察注射LPS后48h雞存活率，血清ALT、

4、AST、TP、ALB、GLB、A/G水平及肝組織病理學(xué)變化。結(jié)果:ELⅢ組雞出現(xiàn)死亡，與較ELⅠ組比較，ELⅡ組雞血清ALT、AST、GLB升高，TP、ALB、A/G降低及肝細(xì)胞病變更顯著。確定ELⅡ組給藥方式為雞肝損傷建模方法，該模型肝細(xì)胞及功能受損明顯，可用于研究家禽肝損傷機(jī)制和復(fù)方甘草酸單胺的護(hù)肝機(jī)理。
　　 2.復(fù)方甘草酸單胺可溶性粉對(duì)恩諾沙星聯(lián)合LPS致雞肝損傷的保護(hù)機(jī)理研究
　　 2.1 動(dòng)物分組、建模、給藥

5、及采樣動(dòng)物分組:104羽海藍(lán)蛋雞隨機(jī)分為空白組(Ⅰ)、模型組(Ⅱ)和復(fù)方甘草酸單胺預(yù)防組(Ⅲ)、治療高(Ⅳ)、低(Ⅴ)劑量組。建模:除Ⅰ組外，其余各組按照以上確定方法建立肝損傷模型。給藥:Ⅲ組在建模前三天以40mg/L混飲復(fù)方甘草酸單胺持續(xù)到建模結(jié)束;Ⅳ、Ⅴ組分以22.5mg/kg、7.5mg/kg劑量灌服復(fù)方甘草酸單胺，2次/d，重復(fù)3天。建模后6h、24h、48h采血，部分血樣分離血清，部分抗凝，采血后剖檢肝臟。
　　 2.

6、2 復(fù)方甘草酸單胺可溶性粉對(duì)雞肝功能保護(hù)作用全自動(dòng)生化分析儀檢測雞血清中ALT、AST、TP、ALB、TBIL、DBIL、γ-GT，HE染色觀察雞肝組織病理學(xué)變化。結(jié)果Ⅱ組較Ⅰ組，在6h、24h和48h雞血清中ALT、AST、γ-GT和TBIL水平顯著升高，TP和ALB顯著下降。與Ⅱ組相比:Ⅲ組雞血清中ALT在6h，AST、γ-GT和TBIL在6h和24h顯著降低，TP在6h，ALB在6h、24h和48h顯著升高;Ⅳ組ALT、AST、γ

7、-GT和TBIL水平在24h和48h顯著降低，TP和ALB在24h和48h顯著升高;Ⅴ組各指標(biāo)差異不顯著。檢測到DBIL在24h和48h顯著升高，其余組差異不顯著。組織病理學(xué)觀察，Ⅳ組中較其他組肝細(xì)胞病變改善明顯。表明復(fù)方甘草酸單胺粉對(duì)恩諾沙星聯(lián)合LPS誘導(dǎo)肝損傷有一定的保護(hù)作用，效果受給藥時(shí)機(jī)和劑量的影響。
　　 2.3 復(fù)方甘草酸單胺可溶性粉的抗自由基損傷作用酶標(biāo)儀檢測血清中MDA、NO、SOD和GSH含量。結(jié)果Ⅱ組較Ⅰ組，

8、在6h、24h和48h雞血清中MDA和NO水平均顯著升高，SOD和GSH均顯著下降。與Ⅱ組相比:Ⅲ組雞血清中MDA和NO在6h和24h，MDA在48h顯著降低，SOD在6h，GSH在6h、24h和48h顯著升高;Ⅳ組MDA和NO水平在24h和48h均顯著降低，SOD和GSH在24h和48h均顯著升高;Ⅴ組各指標(biāo)差異均不顯著?？梢娮杂苫鶕p傷介導(dǎo)恩諾沙星聯(lián)合LPS誘導(dǎo)雞肝損傷過程，復(fù)方甘草酸單胺粉的保護(hù)作用可能依賴抗自由基損傷。
　　

9、 2.4 復(fù)方甘草酸單胺可溶性粉的免疫調(diào)節(jié)作用 ELISA法檢測雞血清TNF-α、IL-1、IL-6含量，流式細(xì)胞儀檢測雞外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ⅱ組與Ⅰ組相比，雞血清TNF-α、IL-1、IL-6含量在6h、24h和48h顯著升高，CD3+、CD4+和CD8+細(xì)胞含量在6h、24h顯著降低，48h顯著升高。與Ⅱ組相比:Ⅲ組TNF-α和IL-6在6h顯著降低，CD3+、CD4+和CD8+T細(xì)胞在48h升高