獸用抗微生物藥物殘留質(zhì)譜篩選方法研究.pdf

1、獸藥作為發(fā)展現(xiàn)代畜牧業(yè)的物質(zhì)基礎(chǔ)，在降低畜禽的發(fā)病率與死亡率、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、改善動(dòng)物產(chǎn)品品質(zhì)和提高飼料利用率方面起到了重要的作用。抗微生物藥物是我國(guó)使用最廣泛的獸藥，包括抗生素如β-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、氯霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可胺類、多肽類及泰妙菌素等其他類抗生素、化學(xué)合成抗菌藥如磺胺類及其增效劑、喹諾酮類、喹噁啉類及硝基咪唑等其他藥物以及抗真菌藥和抗病毒藥，因此抗微生物藥物的殘留檢測(cè)尤為重要。但由于養(yǎng)殖業(yè)界一些人士缺乏科學(xué)用藥的知識(shí)，

2、或受經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，不合理用藥與非法用藥的現(xiàn)象仍很嚴(yán)重，如含β-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、磺胺類藥物等抗菌類藥的“有抗奶”問(wèn)題，豬肉中磺胺類、喹諾酮類藥物殘留超標(biāo)等?？刮⑸锼幬餁埩艨墒谷梭w中細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，擾亂人體微生態(tài)而產(chǎn)生各種毒副作用如氯霉素可引起貧血灰嬰綜合征、白血病等，磺胺類藥物可引起腎損害，四環(huán)素可致心肌損害。現(xiàn)有獸藥抗微生物藥物多殘留檢測(cè)的分析方法，基質(zhì)還比較單一，藥物種類還不夠全面，藥物數(shù)量還比較少，同時(shí)針對(duì)多種動(dòng)物源性食品及

3、代謝物尿液的多類100種以上抗微生物藥物的檢測(cè)分析方法還比較缺乏。因此，本研究針對(duì)抗微生物藥物多殘留檢測(cè)分析方法的不足，建立了多類動(dòng)物源性食品中和尿液中10類120種抗微生物藥物的檢測(cè)的分析方法，為動(dòng)物源性食品中抗微生物藥物的殘留檢測(cè)、食品質(zhì)量安全評(píng)估提供技術(shù)支持。
　　 建立了豬、牛、羊的肌肉、肝臟和腎臟、雞的肌肉、肝臟、雞蛋、蜂蜜、牛奶、魚(yú)肉、豬尿液動(dòng)物源性組織中喹喏酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、β-內(nèi)酰胺類、硝基咪唑類、磺胺類、林可胺

4、類、喹噁啉類、氯霉素類、四環(huán)素類和其他抗微生藥物原型及其代謝物10類120種抗微生物藥物的液相色譜.串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)。樣品前處理采用簡(jiǎn)單的液-液萃取和固相萃取，液-液萃取采用提取范圍比較寬的乙腈作為主要提取溶劑，采用二步提取法，第一步用乙腈作為提取溶劑，提取出大部分藥物，第二步采用水提取，提取出水溶性藥物，方法簡(jiǎn)單，溶劑易于取得，固相萃取選擇pH范圍較廣的HLB小柱凈化，OasisHLB柱子由于吸附藥物pH范圍的寬闊性，用

5、于酸性、中性和堿性化合物，具有杰出的批次間回收率。甲酸甲醇和乙酸乙酯洗脫，甲酸甲醇可洗脫下大部分藥物易溶于有機(jī)溶劑的藥物，乙酸乙酯洗脫一部分脂溶性藥物，甲酸甲醇和乙酸乙酯依次洗脫，確保藥物全部洗脫下來(lái)，初始流動(dòng)相溶解，LC-MS/MS上樣檢測(cè)，采用C18色譜分離，乙腈.甲酸水色譜分離，所有藥物在60分鐘內(nèi)分離、檢測(cè)。MRM模式下檢測(cè)，正、負(fù)離子同時(shí)掃描，每個(gè)藥物離子在最優(yōu)的質(zhì)譜條件下檢測(cè)。結(jié)果顯示：各類藥物在動(dòng)物源性食品和尿液中的最低檢

6、測(cè)限0.5μg/kg～3.0μg/kg，最低定量限1.5μg/kg～10.0μg/kg，雞蛋、牛奶、肌肉、肝臟和腎臟中70%藥物的平均回收率30%～50%，一部分藥物如頭孢類抗生素藥物在組織中的回收率會(huì)出現(xiàn)低于30%的現(xiàn)象，尿液中藥物的回收率86.8%～99.2%，雞蛋、牛奶、肌肉、肝臟、腎臟和尿液中的變異系數(shù)≦30.0%，符合農(nóng)業(yè)部分析方法的要求。
　　 首次建立了動(dòng)物源性食品和尿液中10類120種抗微生藥物多殘留的篩選分析方

7、法，檢測(cè)限低于藥物的最大殘留限量。檢測(cè)藥物種類和數(shù)量多，包括極性強(qiáng)與弱極性的，脂溶性的與水溶性的藥物，克服了傳統(tǒng)檢測(cè)方法只能檢測(cè)單一種類、單一藥物或僅僅幾類藥物的不足。檢測(cè)的樣品基質(zhì)多，包括豬、牛、羊的肌肉、肝臟和腎臟、雞的肌肉和肝臟、雞蛋、蜂蜜、牛奶、魚(yú)肉和尿液等16種基質(zhì)，解決了目前檢測(cè)方法中樣品基質(zhì)單一的問(wèn)題。樣品前處理方法簡(jiǎn)單，試劑用量少，節(jié)約了檢測(cè)成本和檢測(cè)時(shí)間。方法的檢測(cè)限和定量限都低于藥物的殘留限量。本研究可為動(dòng)物源性食品