質(zhì)譜技術(shù)在臨床微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用

1、質(zhì)譜技術(shù)在臨床微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用,,（一）、現(xiàn)代感染性疾病和 臨床微生物檢測現(xiàn)狀,耐藥菌株增多,疑難菌株增多,現(xiàn)代感染性疾病新特點(diǎn),條件致病菌增多,人員少、鑒定速度較慢,感染菌種類增多,臨床微生物當(dāng)前現(xiàn)狀,,常規(guī)微生物檢驗(yàn)遇到的困惑：,★呼吸道、腸道標(biāo)本的細(xì)菌種類繁多，常規(guī)的鑒定成本高或者操作麻煩， 容易漏掉或者忽視某些細(xì)菌?！飬捬蹙澢?、分枝桿菌和真菌：細(xì)菌鑒定的死角，技術(shù)上不好掌 握或者目前的方法難以實(shí)施?！镂⑸?/p>

2、的分級報告制度：存在很多變數(shù)，使得初次報告的結(jié)果可靠性 得不到臨床的認(rèn)可。（比如：直接涂片，初步能估計細(xì)菌大類，但是 無法確切的到種，和耐藥情況。）,實(shí)驗(yàn)室要求：操作方便的，成本便宜的，性價比高的，臨床迫切需要的。,,,臨床微生物實(shí)驗(yàn)室自動化,將實(shí)驗(yàn)室人員從一些技術(shù)要求較低的、能由儀器完成的工作中解脫出來，提高標(biāo)本處理效率，縮短TAT時間。,臨床的需求……,安圖生物Autof ms1000,MALDI-TOF革命性,臨床微生物,獸醫(yī)微

3、生物,食品微生物（食品安全與質(zhì)控）,,,,,,,,,,,環(huán)境微生物監(jiān)測,質(zhì)譜的應(yīng)用領(lǐng)域,（二）、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜儀MALDI-TOF MS 的組成,,,飛行時間質(zhì)量檢測器（TOF）,基質(zhì)輔助激光解吸電離離子源（MALDI）,數(shù)據(jù)庫,MALDI-TOF MS,主機(jī),（三）、MALDI-TOF MS 的原理基本原理是將樣品分散在基質(zhì)分子中并形成晶體。當(dāng)用激光照射晶體時，基質(zhì)從激光中吸收能量，樣品解吸附，基質(zhì)-樣品之間發(fā)

4、生電荷轉(zhuǎn)移使得樣品分子電離，電離的樣品在電場作用下飛過真空的飛行管，根據(jù)到達(dá)檢測器的飛行時間不同而被檢測，即通過離子的質(zhì)量電荷之比（M/Z）與離子的飛行時間成正比來分析離子，從而測得并繪出樣品分子的質(zhì)譜圖。,蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)。不同的細(xì)菌或不同疾病的樣品，其蛋白質(zhì)的種類和含量不同。不同的蛋白質(zhì)解析后形成的多肽片段的種類、數(shù)量和分子量也不一樣，因而在一定的條件下，在電離空間的運(yùn)動速度和距離不同。用質(zhì)譜儀將各種蛋白質(zhì)解析后在電離空間的運(yùn)

5、動速度和距離的軌跡記錄和描繪下來，則會形成不同的曲線圖形。,（四）、操作簡便,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,樣品靶板,細(xì)菌與基質(zhì),,飛行管,檢測器,,,,質(zhì)譜圖,,,真空系統(tǒng),,樣品靶板 入口,,幾秒鐘即可得到結(jié)果,基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時間質(zhì)譜,(MALDI-TOF MS),,MALDI-TOF MS蛋白質(zhì)指紋特征,質(zhì)譜檢測流程,鑒定結(jié)果,顯示綠色并且分?jǐn)?shù) 最高的為該樣品的 鑒定結(jié)果。,Bruk

6、er的結(jié)果報告：,優(yōu)點(diǎn)：直接可以打印缺點(diǎn)：目前沒有做接口連接到實(shí)驗(yàn)室的LIS系統(tǒng),,與現(xiàn)有傳統(tǒng)的鑒定診斷技術(shù)相比，具有操作簡單、快速、通量高、靈敏度高、準(zhǔn)確度好、試劑耗品非常經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢。,對臨床的意義：分級報告，縮短了TAT時間，尤其是厭氧菌、奴卡菌等非常難鑒定的菌提供巨大的幫助。,五、實(shí)現(xiàn)血培養(yǎng)的三級報告,,,,,,,,,微生物診斷技術(shù)不斷發(fā)展給臨床帶來了什么？,1、非培養(yǎng)/難培養(yǎng)微生物的檢測能力大大提高2、縮短了常規(guī)微生物培養(yǎng)

7、鑒定診斷藥敏時間(即TAT時間)3、從微生物檢驗(yàn)角度提供精準(zhǔn)的診斷,六、安圖微生物質(zhì)譜Autof ms1000的優(yōu)勢,1、本土產(chǎn)品,維護(hù)保養(yǎng)方便及時,試劑、耗材供應(yīng)及時,價格便宜,數(shù)據(jù)庫主要包含：474個屬、2613多種、9531株（包含細(xì)菌、真菌等）正在開發(fā)的數(shù)據(jù)庫：生物反恐、腸道微生物、海洋致病微生物、肉類蛋白數(shù)據(jù)庫……,操作簡便,中文界面，單個軟件即可完成編輯、采集、鑒定；快速鑒定功能方便使用。,準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好,,,

8、,上海臨檢中心評估項目總結(jié)：,,01 ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株鑒定準(zhǔn)確性安圖質(zhì)譜檢測微生物的結(jié)果與172株ATCC國際標(biāo)準(zhǔn)菌株的一致性為97.67%，高于布魯克的93.60%。,02 臨床菌株鑒定準(zhǔn)確性安圖質(zhì)譜Autof ms1000對176株臨床菌株的鑒定準(zhǔn)確性為100%，高于布魯克的98.30%。,04 鑒定重復(fù)性安圖質(zhì)譜Autof ms1000對65株實(shí)驗(yàn)菌株的鑒定結(jié)果全部可靠，重復(fù)性較好。,03 不同前處理方法的鑒定準(zhǔn)確性三種前

9、處理方式安圖質(zhì)譜Autof ms1000的鑒定準(zhǔn)確性均高于布魯克質(zhì)譜，其中甲酸裂解法更適于臨床使用。,Autof ms1000鑒定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，適于臨床微生物檢測。,中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院評估結(jié)論,Autof ms1000鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性、重復(fù)性可靠,,,,,,,,,MALDI-TOF MS對血培養(yǎng)陽性樣本的直接檢測,,,,優(yōu)點(diǎn)：快速。缺點(diǎn)：操作麻煩，且抽濾容易產(chǎn)生氣溶膠，污染環(huán)境。不易于在臨床推廣。 鑒定的缺陷：多重菌感染不能鑒定，

10、或者鑒定有誤，鏈球菌等難于區(qū)分的菌是最大的問題。,,,,,,MRSA的鑒別和分型,,,,[Edwards-Jones et al. J Med Microbiol. 2000],MRSA的鑒別和分型,,,,,[Wolters et al. IJMM. 2011],,,,,,從圖中可見，可 以做同源性的比 較,使用體會,成本低，快速，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確，性價比高。 可以聚類分析，即同源性的研究，在耐藥上有優(yōu)勢?？梢越熘袥]有的細(xì)菌的數(shù)據(jù)