人參、西洋參和甘草組織培養(yǎng)研究.pdf

1、人參（Panax ginseng C.A.Meyer）、西洋參（Panax quinquefolium L.）和甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）屬于大宗類藥材，應用十分廣泛。本文建立了人參不定根、西洋參細胞和甘草細胞培養(yǎng)體系，并進行了反應器培養(yǎng)研究。
　　本文以5年生人參根為外植體誘導出愈傷組織，在附加IBA5mg·L-1的MS培養(yǎng)基中，由愈傷組織誘導得到人參不定根。采用5L近球型鼓泡式反應器培養(yǎng)人

2、參不定根40天后，生長速率達到50倍?？傇碥蘸吭谂囵B(yǎng)第30天達到最大值。利用LC-MS鑒定了人參不定根中8種人參皂苷單體（Rg1、Re、Ro、Malonyl-Rb1、Rb1、Rc、Rb2和Rd）；人參不定根培養(yǎng)體系生長速度較快，皂苷合成能力也有明顯優(yōu)勢。利用誘導子10mg/LMJ培養(yǎng)人參不定根24h后，人參皂苷含量顯著提高，其中以二醇型皂苷尤為顯著，這一結果與SE,DS,P450基因表達密切相關?？寡趸钚匝芯勘砻鳎喝藚⒉欢ǜ性碥蘸?/p>

3、多糖的DPPH抑制率均高于栽培人參。不定根中皂苷含量為60mg·L-1時，DPPH抑制率為96.03％。
　　以5年生栽培西洋參為外植體誘導出愈傷組織，將愈傷組織加入到附加2mg·L-12,4-D，0.25mg·L-1KT的MS培養(yǎng)基中誘導得到懸浮細胞。5L反應器培養(yǎng)中，西洋參細胞的生長和活性成分含量基本在第21天達到最大值，這一過程與營養(yǎng)成分消耗相關。添加混合誘導子后（100mg·L-1LH和2mg·L-1MJ），細胞的生物量和

4、多糖含量沒有顯著變化，而皂苷含量要高于添加單一誘導子的處理組。第16天補加30g·L-1蔗糖后，細胞干重生長率以及多糖含量均高于對照組，多糖產(chǎn)率在第21天達到最大值（1.608g/L），為對照組的1.96倍。西洋參兩步培養(yǎng)法獲得了較高的皂苷產(chǎn)率（31.52mg·L-1）和多糖產(chǎn)率（1.72g·L-1），分別是對照組的4.34倍和2.1倍。西洋參細胞中鑒定出了4種成分，分別為Rg1、Re、Rf和Rb1。較高的多糖含量是西洋參懸浮細胞的顯著

5、優(yōu)勢，但皂苷含量較低?？寡趸钚匝芯勘砻鳎何餮髤⒓毎性碥盏腄PPH抑制率（55.72%）高于栽培西洋參，栽培西洋參和細胞中多糖的DPPH抑制率均較低。
　　以甘草下胚軸為外植體誘導出愈傷組織，將愈傷組織加入到附加1.0mg·L-12,4-D,1.0mg·L-1NAA,0.2mg·L-16-BA的MS培養(yǎng)基中誘導得到懸浮細胞。采用5L近球型鼓泡式反應器培養(yǎng)甘草細胞20天后，干重生長率達到最大值。三萜皂苷和黃酮分別在培養(yǎng)第10天和1

6、5天達到最大值。采用10L近球型鼓泡反應器培養(yǎng)18天后，甘草懸浮細胞生長率為10.86倍。甘草細胞中鑒定出了5種成分，分別為甘草苷、甘草皂苷B、甘草皂苷J2、甘草酸和甘草皂苷B2；甘草細胞中三萜類成分較少且甘草酸含量較低，甘草黃酮的成分和含量與栽培甘草接近。甘草細胞中多糖含量為11.7%，高于栽培甘草。抗氧化活性研究表明：當黃酮濃度為500mg·L-1時，栽培甘草和甘草細胞的DPPH抑制率分別為93.98%和100%。兩種材料中甘草多糖