當(dāng)歸多糖對點帶石斑魚非特異性免疫力的影響.pdf

1、當(dāng)歸多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)對哺乳動物具有免疫調(diào)節(jié)作用,但對水產(chǎn)動物是否具有免疫調(diào)節(jié)作用尚未見報道。本文首先從中草藥當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels中提純當(dāng)歸多糖,并對當(dāng)歸多糖亞組分進行結(jié)構(gòu)分析。然后通過喂食、腹腔注射和體外試驗研究當(dāng)歸多糖對點帶石斑魚(EpinePhelus malabaricus)非特異性免疫力的影響,為當(dāng)歸多糖在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用提

2、供理論依據(jù)。
　　本論文主要研究內(nèi)容和結(jié)論概況如下。用水煮醇沉法從中草藥當(dāng)歸中提取當(dāng)歸粗多糖,乙醇、丙酮脫色、Sevag法除蛋白質(zhì),透析、凍干得當(dāng)歸多糖P0。將當(dāng)歸多糖P0溶液用DE-52纖維素柱層析,依次用蒸餾水、0.1M NaCl、0.2MNaCl、0.4M NaCl洗脫得當(dāng)歸多糖P1、P2、P3和P4四種亞組分。采用高效液相色譜、紅外光譜和甲基化法研究當(dāng)歸多糖P1、P2、P3分子量和結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明:當(dāng)歸多糖P1、P2、P3和

3、P4中蛋白質(zhì)分別為2.21％、1.38％、2.53％和2.34％,總糖分別為95.10％、94.73％、81.68％和79.51％,還原糖分別為5.75％、4.85％、4.86％和4.77％。當(dāng)歸多糖P1、P2、P3分子量分別為4.12x105Da,2.34～105Da和1.94～105 Da。當(dāng)歸多糖P1、P2、P3的單糖組成分別為Glc:Xyl:Gal=18:3:1,GlcA:Glc:Xyl:Gal:7:8:3:2和Glc:Xyl=

4、28:1。當(dāng)歸多糖P1、P2、P3的單糖殘基均為β構(gòu)型的吡喃環(huán)。當(dāng)歸多糖P1中Glcp為1→3,6、1→3和1→連接,Xylp和Galp為1→3連接;當(dāng)歸多糖P2中GlcAp為1→3連接,Glcp為1→3,6、1→3和1→連接,Xylp和Galp為1→3連接;當(dāng)歸多糖P3中Glcp為1→6、1→4、1→3,6、1→3和1→連接,Xylp為1→3連接。
　　為研究當(dāng)歸多糖對點帶石斑魚非特異性免疫力和抗病力的影響,將當(dāng)歸多糖P0按0、

5、500、3000 mg/kg添加到飼料中,喂食點帶石斑魚4、8、12周后取樣。結(jié)果表明:當(dāng)歸多糖P0能顯著提高點帶石斑魚血液白細胞吞噬能力,血清溶菌酶(LZM)活力,頭腎白細胞呼吸爆發(fā)活力、增殖活力和吞噬能力,降低Edwardsiella tarda攻毒后點帶石斑魚的累積死亡率。用3000 mg/kg的當(dāng)歸多糖PO連續(xù)喂食12周,點帶石斑魚非特異性免疫力和抗病力最高。
　　將當(dāng)歸多糖P0按0、500、3000 mg/kg添加到飼料

6、中,連續(xù)喂食101 d,研究當(dāng)歸多糖P0對點帶石斑魚生長和非特異性免疫力的影響。結(jié)果表明:當(dāng)歸多糖P0對點帶石斑魚攝食、生長、體表黏液抗菌活力、血清一氧化氮(NO)、總蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白(A/G)值影響不顯著(p＞0.05);低劑量的當(dāng)歸多糖P0能顯著提高體表黏液LZM活力,而高劑量的當(dāng)歸多糖P0能顯著提高血液白細胞數(shù)、NBT陽性細胞數(shù),并能提高血液白細胞吞噬率和血清LZM活力;當(dāng)歸多糖P0能極顯著降低點帶石斑魚E. Tard

7、a攻毒后的累積死亡率,500、3000 mg/kg組的免疫保護率分別為45％、69％。
　　為研究當(dāng)歸多糖亞組分對點帶石斑魚非特異性免疫力的影響,將當(dāng)歸多糖P1、P2、P3按20 mg/kg體重的劑量腹腔點帶石斑魚,以當(dāng)歸多糖P0做對照,以無菌PBS做空白,在注射前和注射后第3、7、14、21、28 d取樣。結(jié)果發(fā)現(xiàn):當(dāng)歸多糖P0及其亞組分能顯著提高點帶石斑魚體表黏液LZM活力、血液白細胞數(shù)和NBT陽性細胞數(shù)、血清LZM活力、NO

8、含量和A/G值。當(dāng)歸多糖P0能顯著提高點帶石斑魚體表黏液抗菌活力,而各多糖亞組分對黏液抗菌活力影響不顯著。當(dāng)歸多糖P0及其亞組分對點帶石斑魚非特異性免疫力具有時間一效應(yīng)關(guān)系:注射當(dāng)歸多糖免疫指標(biāo)升高,注射后28 d恢復(fù)到空白組水平。注射當(dāng)歸多糖P0及其亞組分均能降低E. Tarda攻毒后點帶石斑魚的死亡率,注射當(dāng)歸多糖P0組死亡率最低。單獨注射當(dāng)歸多糖各亞組分對點帶石斑魚非特異性免疫力的提高不及當(dāng)歸多糖P0。
　　為研究當(dāng)歸多糖亞

9、組分對頭腎白細胞免疫活性的影響,用不同濃度(0、1、10、100、1000μg/mL)的當(dāng)歸多糖亞組分P1、P2、P3體外孵育點帶石斑魚頭腎白細胞,以當(dāng)歸多耱P0做對照,測定當(dāng)歸多糖對白細胞增殖、呼吸爆發(fā)和吞噬能力的影響。結(jié)果表明:當(dāng)歸多糖P0及其亞組分體外能提高點帶石斑魚頭腎白細胞增殖、吞噬和呼吸爆發(fā)活力。頭腎白細胞增殖和呼吸爆發(fā)活力隨當(dāng)歸多糖P0及其亞組分劑量的增加而增強。當(dāng)歸多糖P0(1000μg/mL)對增殖影響顯著。當(dāng)歸多糖P

10、2(1-1000μg/mL)對呼吸爆發(fā)活力影響顯著。頭腎白細胞吞噬能力隨當(dāng)歸多糖P0及其亞組分劑量的增加呈顯著的先升高后下降的趨勢。當(dāng)歸多糖P、P1為100μg/mL時吞噬能力最高,當(dāng)歸多糖P2和P3在10μg/mL時吞噬能力最高。
　　總之,當(dāng)歸多糖P0及其亞組分P1、P2、P3通過提高體液和細胞免疫的方式提高點帶石斑魚非特異性免疫力和抗病力。各亞組分單獨作用時對點帶石斑魚非特異性免疫力的提高不及當(dāng)歸多糖P0。當(dāng)歸多糖亞組分在結(jié)