黃芪最細(xì)粉、免煎顆粒與飲片三種規(guī)格質(zhì)量控制的對(duì)比研究

1、<p><b>　　編號(hào)：</b></p><p>　　瀘州醫(yī)學(xué)院自然科學(xué)基金</p><p><b>　　課題申報(bào)書</b></p><p>　　項(xiàng)目名稱：黃芪配方顆粒、最細(xì)粉與傳統(tǒng)飲片三種劑型質(zhì)量控制的對(duì)比研究</p><p><b>　　項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：王 謙</b>

2、;</p><p>　　起止時(shí)間：2012年1月至2013年12月</p><p>　　所在部門：瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院藥劑科</p><p><b>　　所屬學(xué)科：中藥學(xué)</b></p><p>　　聯(lián)系電話：13882792551</p><p>　　填報(bào)日期：2011年11月20日</

3、p><p>　　瀘 州 醫(yī) 學(xué) 院 </p><p>　　2011年11月10日制</p><p><b>　　申 請(qǐng) 者 承 諾</b></p><p>　　我保證申請(qǐng)書內(nèi)容的真實(shí)性。如能獲得資助，我將履行項(xiàng)目負(fù)責(zé)人職責(zé)，嚴(yán)格遵守學(xué)院科研計(jì)劃管理辦法的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作的時(shí)間，認(rèn)真開展工作，做好相關(guān)實(shí)驗(yàn)記錄，按時(shí)報(bào)

4、送相關(guān)材料。若填報(bào)失實(shí)或違反相關(guān)規(guī)定，本人將承擔(dān)全部責(zé)任。</p><p>　　項(xiàng)目負(fù)責(zé)人（簽名）：</p><p>　　2011 年 11 月 20 日 </p><p>　　特別說明：此頁提綱供重點(diǎn)項(xiàng)目、青年基金項(xiàng)目類別使用。</p><p>　　課題名稱：黃芪配方顆粒、最細(xì)粉與飲片三種劑型藥效的對(duì)比研究</p><p

5、>　　一、研究課題摘要（簡要說明課題研究內(nèi)容、方法及意義，300—400字。）；</p><p>　　研究內(nèi)容：黃芪具有補(bǔ)氣固表、利水退腫、托毒排膿、生肌等功效。為充分發(fā)揮黃芪的功效，作為其新開發(fā)的劑型，黃芪配方顆粒和最細(xì)粉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)國家均尚無法定依據(jù)。由于中藥的有效成分復(fù)雜，采用不同的提取方法或生產(chǎn)工藝，其有效成分差異大（1）。為確保該藥物臨床使用的有效性，擬對(duì)黃芪配方顆粒、最細(xì)粉與傳統(tǒng)飲片的質(zhì)量進(jìn)行對(duì)比研

6、究，評(píng)估其質(zhì)量差異，判別配方顆粒和最細(xì)粉使用價(jià)值，為制定法定的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)。</p><p>　　方法：① 定性研究：采用TLC方法，分別對(duì)黃芪配方顆粒、最細(xì)粉與傳統(tǒng)飲片進(jìn)行定性對(duì)比研究，比較有效成分的差別。</p><p>　?、诙垦芯浚翰捎肏PLC法，分別對(duì)黃芪配方顆粒、最細(xì)粉和傳統(tǒng)飲片進(jìn)行定量對(duì)比研究，比較主要成分的含量差異。</p><p>　

7、　意義：通過黃芪三種劑型的質(zhì)量控制對(duì)比研究，評(píng)估其質(zhì)量差異，判別配方顆粒和最細(xì)粉是否具有傳統(tǒng)飲片相應(yīng)的臨床療效，為臨床合理使用提供理論依據(jù)，以及為中藥配方顆粒和最細(xì)粉制定法定的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)。</p><p>　　二、課題立項(xiàng)的依據(jù)(包括立項(xiàng)的必要性、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及分析、主要參考文獻(xiàn)目錄，若為國際合作交流項(xiàng)目，須闡明國際合作的必要性和可行性)；</p><p>　　國家食品藥品

8、監(jiān)督管理文件（國藥監(jiān)注[2002]211號(hào)），根據(jù)《藥品管理法》的有關(guān)規(guī)定，“中藥配方顆粒”將納入中藥飲片實(shí)施批準(zhǔn)文號(hào)管理范圍。</p><p>　　單味中藥配方顆粒劑，做為中藥現(xiàn)代化劑型改革的成果，從研發(fā)生產(chǎn)到投入臨床使用，已有十余年歷程[1]。中藥配方顆粒和傳統(tǒng)中藥飲片相比有以下優(yōu)勢：1. 質(zhì)量安全控制更高：中藥配方顆粒劑是通過科學(xué)炮制的傳統(tǒng)中藥飲片為原料，再經(jīng)過現(xiàn)代化制藥技術(shù)提取、分離、濃縮、干燥、制粒、包

9、裝，根據(jù)每一藥材有效成分的性質(zhì)，制定出生產(chǎn)工藝，具有嚴(yán)格的質(zhì)量保證體系和保證臨床療效的物質(zhì)基礎(chǔ)。2. 儲(chǔ)存攜帶和使用方便[2]：免煎中藥顆粒體積小，易于儲(chǔ)存。密封性好，不易吸潮，能避免儲(chǔ)藏、保管不當(dāng)帶來的泛油、變色、蟲蛀、霉變、風(fēng)化的問題。減少污染，保質(zhì)期長。而且免煎中藥即沖即服，方便、快捷、安全、體積小，攜帶方便，不受場地、時(shí)間的限制，如出差、上班、兒童上學(xué)都可按時(shí)服用，很容易讓廣大人民群眾接受。傳統(tǒng)中藥體積大，攜帶儲(chǔ)存都不方便，對(duì)儲(chǔ)

10、存環(huán)境要求較高，有的品種易發(fā)霉變質(zhì)，遭蟲蛀鼠咬，影響療效。3.使用方便：不需要煎煮，臨用時(shí)溫開水配成沖劑；小劑量精細(xì)包裝，沖服濃度可自行調(diào)解，服用劑量?。粏挝凰幬镏亓枯p，體積小，儲(chǔ)存和運(yùn)輸方便；復(fù)合鋁箔包裝，攜帶、保存方便；安全衛(wèi)生、防潮防蛀、保質(zhì)期長；藥品名稱印刷清晰，配方清潔衛(wèi)生，有利于加</p><p>　　中藥配方顆粒仍然存在一些值得深一步研究的地方[3]。雖然從臨床應(yīng)用情況看，配方顆粒劑的藥效與飲片共煎

11、的藥效沒有顯著差別，但配方顆粒是單味中藥的提取，沒有藥物間共同加熱、藥物之間相互作用的過程。每味中藥都是一個(gè)復(fù)雜化工程，它所含的成分有幾十種甚至幾千種之多，它們?cè)谶@個(gè)方子中是有效成分，可能到那個(gè)方子中，就不是它在起作用了。何況幾味，十幾味中藥放在一起，經(jīng)過共熱過程。在這其間，它們所含的成分之間在熱與水的條件下，會(huì)產(chǎn)生多少新物質(zhì)？ 有研究表明，如麻杏石甘湯共煎，麻黃堿、桂皮醛和氰基苯甲醛生成新的化學(xué)成分， 其藥效優(yōu)于分煎。又如小柴胡湯是《

12、傷寒論》經(jīng)典方劑，有和解少陽，疏利三焦氣機(jī)之功。在臨床上應(yīng)用廣泛。配方顆粒與中藥合煎的化學(xué)成分是否相同，特別是藥效是否接近， 這是評(píng)價(jià)中藥顆粒配方能否取代中藥合煎的重要依據(jù)。采用紫外分光光度法， 以黃芩苷為對(duì)照品，在278nm 處，對(duì)小柴胡湯合煎液，單煎液，單煎合并液以及黃芩和處方中其他藥物的配伍煎液中總黃酮進(jìn)行測定。結(jié)果顯示：各煎液和合煎液比較均有極顯著差異（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)還表明，將干姜、甘草與附子分煎后再混合，或各單煎后次序給

13、藥，其毒性仍相當(dāng)于單</p><p>　　中藥配方顆粒發(fā)展前景廣闊[4]。近些年來，隨著中藥配方顆粒研究深入，產(chǎn)業(yè)不斷發(fā)展，規(guī)模不斷擴(kuò)大，2009年，全國中藥配方顆粒年試制產(chǎn)量超10000噸，年銷售額達(dá)十多億元人民幣，占中藥飲片年銷售額的6％，且每年正以30％以上的速度遞增，其產(chǎn)業(yè)化趨勢已經(jīng)形成。中藥配方顆粒已為越來越多的醫(yī)患所接受。2010年7月26號(hào)，國家藥品監(jiān)督管理局頒布中藥配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的技術(shù)要求。

14、2010年7月30號(hào)，衛(wèi)生部副部長兼國家中醫(yī)藥管理局局長王國強(qiáng)在中藥配方顆粒試點(diǎn)工作總結(jié)交流會(huì)上表示，目前是中醫(yī)藥發(fā)展的良好時(shí)機(jī)，中藥配方顆粒應(yīng)加強(qiáng)臨床實(shí)踐應(yīng)用，并做好質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一，進(jìn)一步加強(qiáng)科學(xué)研究，推動(dòng)中藥現(xiàn)代化的發(fā)展。</p><p>　　現(xiàn)在中藥配方顆粒大多采用的是企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，而中藥飲片和中藥最細(xì)粉大多采用的是2011年版藥典標(biāo)準(zhǔn)或部頒標(biāo)準(zhǔn)。中藥配方顆粒至今尚未形成國家統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。</p>

15、<p>　　作為一味非常常用的中藥，黃芪的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在《中國藥典》（2010版一部）中分別對(duì)鑒別、浸出物、檢查、含量測定等分別制定了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)，尤其是含量測定項(xiàng)目規(guī)定本品按干燥品計(jì)算，含黃芪甲苷(C41H68O14)不得少于0.040％。而中藥配方顆粒采用的是企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，其檢查項(xiàng)目中不包括含量測定這一項(xiàng)目。所以為了推動(dòng)中藥現(xiàn)代化的發(fā)展，保證中藥配方顆粒質(zhì)量，對(duì)黃芪配方顆粒制定更高的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是非常必要的。</p>

16、<p>　　藥典記載表明研究中藥的超微細(xì)粉具有非常重要的意義，但藥典只規(guī)定了部分中藥以細(xì)粉入藥，本課題的黃芪并未作此規(guī)定。上述研究內(nèi)容相對(duì)比較單一，或從有效成分含量方面研究，或只研究中藥細(xì)粉，缺乏從藥理試驗(yàn)和臨床療效來證明超微細(xì)粉或顆?；蝻嬈欠袼幮ё罴选?lt;/p><p>　　國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及分析</p><p>　　戴啟文[5]在《淺談中藥配方顆粒劑與湯劑的比較研究》中表示，傳

17、統(tǒng)中藥湯劑是將處方中各種中藥飲片混合在一起、加水、經(jīng)過一定時(shí)間的煎煮，熬汁而成。由于中藥中化學(xué)成分復(fù)雜，所以在合煎過程中可能會(huì)發(fā)生酸堿中和成鹽、重排、酯水解、苷類等的糖鏈水解、聚合、縮合、氧化等化學(xué)反應(yīng)。相對(duì)而言，中藥配方顆粒是“單味提取，混合沖服”，就沒有這些復(fù)雜的過程。對(duì)同一個(gè)方荊的中藥配方顆粒劑與傳統(tǒng)中藥湯劑的化學(xué)組成進(jìn)行比較分析，多是測定主要有效成分含量的變化及其在相同色譜條件下指紋圖譜的差異。</p><p

18、>　　沈紅等[6]在《SPE．HPLC—ELSD法測定黃芪配方顆粒中黃芪甲苷的含量》中研究到，用水飽和正丁醇萃取．HPLC-ELSD法測定黃芪甲苷的含量，該方法過程較復(fù)雜，溶劑用量多，實(shí)驗(yàn)中易造成黃芪甲苷的損失，使測定結(jié)果偏低。本文采用固相萃取結(jié)合高效液相色譜法測定該含量，操作簡便，結(jié)果可靠。在本實(shí)驗(yàn)過程中需要首先考察樣品溶液及洗脫溶液的甲醇濃度。繪制黃芪甲苷的洗脫曲線，結(jié)果甲醇濃度在60％以下，洗脫液中無黃芪甲苷，純甲醇洗脫，黃

19、芪甲苷回收率為106％。故用60％甲醇作為提取溶劑上樣，用純甲醇作為洗脫溶劑。測定過程中如不經(jīng)過氨水堿化，則含量較低，堿化后含量明顯提高，這與文獻(xiàn)中報(bào)道用正丁醇萃取后用氨水洗相符。氨水用量對(duì)測得黃芪甲苷量也有影響，經(jīng)考察，加3 mL氨水最好。實(shí)驗(yàn)還比較了固相萃取與水飽和正丁醇萃取法這兩種方法對(duì)測得黃芪甲苷測量的影響，結(jié)果為前者測得的含量為0.3290％；后者為0.286 3％。說明采用固相萃取方法測得的黃芪甲苷量比水飽和正丁醇萃取法要高

20、，處理過程中損失較少，可提高含量測定的準(zhǔn)確性。</p><p>　　翟旭峰[7]等在薄層掃描法測定黃芪配方顆粒中黃芪甲苷的含量的研究中發(fā)現(xiàn)，采用水飽和的正丁醇直接超聲提取，濃氨試液萃取，并比較了超聲時(shí)問對(duì)黃芪甲苷提取率的影響及展開系統(tǒng)的選擇，優(yōu)化了黃芪配方顆粒中黃芪甲苷提取方法及展開系統(tǒng)條件，建立了快速、簡便、經(jīng)濟(jì)的含量測定方法。實(shí)驗(yàn)比較了不同超聲時(shí)間和展開劑比例的調(diào)節(jié)效果，測定結(jié)果以超聲lh為宜，可使黃芪甲苷的

21、量提取較完全；以正丁醇一醋酸乙酯一稀氨水(1-lO)(4：15)為比例的上層溶液為展開劑，可使黃芪甲苷的斑點(diǎn)分離效果較好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)超聲提取時(shí)問少于1h，黃芪配方顆粒中的黃芪甲苷提取不完全；當(dāng)展開劑正丁醇一醋酸乙酯一稀氨水(1-10)以(8：2：10)為比例的上層溶液時(shí)，黃芪甲苷的斑點(diǎn)分離不好，Rf值太??；以(8：1：10)為比例的上層溶液時(shí)，黃芪甲苷斑點(diǎn)不集中且分離不佳。黃芪甲苷的含量測定方法比藥典方法簡單，節(jié)省時(shí)間，重復(fù)性較好

22、，具有快速、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，可降低檢驗(yàn)成本。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，認(rèn)為可作為黃芪配方顆粒的含量測定方法。</p><p>　　梁德宇[8]在黃芪桂枝五物湯配方顆粒對(duì)手術(shù)后患者免疫功能的影響研究中發(fā)現(xiàn)，64例病例隨機(jī)分為兩組，每組32例。兩組病例術(shù)前常規(guī)禁食，術(shù)后常規(guī)給予葡萄糖、電解質(zhì)、抗生素5 天。施藥組術(shù)前3 天每天口服黃芪桂枝五物湯的配方顆粒。結(jié)果：兩組病例手術(shù)后第l天與手術(shù)前第3天檢測指標(biāo)比較，說明中等以上手術(shù)對(duì)

23、患者的免疫功能影響比較大．這與臨床實(shí)際情況接近。手術(shù)后第7天，施藥組與對(duì)照組同一檢測指標(biāo)比較，相應(yīng)指標(biāo)明顯升高(P<0．05)。手術(shù)后第7夭與手術(shù)前第3天同一檢測指標(biāo)值的差值比較得出結(jié)論：黃芪桂枝五物湯配方顆?？梢杂行У馗纳泼庖吖δ堋?lt;/p><p>　　劉志勤[9]在三種中藥飲片的比較中發(fā)現(xiàn)，散裝飲片醫(yī)生可以根據(jù)病情決定飲片使用劑量，靈活運(yùn)用。而小包裝飲片與中藥配方顆粒限于規(guī)格的限定，有時(shí)難免使醫(yī)生在臨床

24、應(yīng)用時(shí)有所限制，進(jìn)而影響療效。同時(shí)中藥配方顆粒直接沖服，忽視了“ 單煎”與“ 合煎”的問題傳統(tǒng)湯劑在諸味藥合煎過程中，能產(chǎn)生一系列物理化學(xué)變化，達(dá)到增強(qiáng)療效，解毒和緩和藥性的作用，充分體現(xiàn)中醫(yī)方劑中各藥物的配伍作用，而中藥配方顆粒由于是單味提取，故不具備以上優(yōu)勢傳統(tǒng)中藥飲片經(jīng)過幾千年的發(fā)展而未被取代，足以證明其科學(xué)性和獨(dú)特性。中藥飲片改革不可能一蹴而就，需要人關(guān)人員不懈努力和探索。因此，本文所列的三種飲片，在日常配方和使用中各有利弊，難

25、稱非常完美，需要廣大中醫(yī)藥工作者繼續(xù)發(fā)揮聰明才智不斷創(chuàng)新，選擇一種最佳的飲片模式，或是幾種模式一個(gè)最優(yōu)的結(jié)合點(diǎn)，能讓這種飲片發(fā)揮最大的優(yōu)點(diǎn)，這樣才能更好地服務(wù)于社會(huì)、服務(wù)于中醫(yī)藥事業(yè)。</p><p>　　羅文匯[10]在陳皮配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中發(fā)現(xiàn)，采用薄層色譜(TLC)法進(jìn)行定性鑒別；運(yùn)用傅立葉變換紅外光譜(FTIR)法進(jìn)行檢驗(yàn)；采用高效液相色譜(HPLC)法測定方中橙皮苷含量，色譜柱為Agilent HC

26、—C-8柱(250 mm x4.6 mm，5μm)，甲醇一醋酸一水(35：4：61)為流動(dòng)相，流速為0.8 mL／min，柱溫為30℃，檢測波長為283．4 nm。結(jié)果用薄層色譜法檢出了方中的橙皮苷。紅外光譜法對(duì)陳皮配方顆粒所舍基團(tuán)進(jìn)行了詳細(xì)分析．高效液相色譜法測定的橙皮苷進(jìn)樣量線性范圍為0.676—4.056μg，回歸方程為Y=600.75962X-21.199,r=0.9999，平均回收率為97.6l％，RSD=0.80％(n=6)

27、。所建立的方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為陳皮配方顆粒的質(zhì)量控制方法。</p><p>　　《中國藥典》[11]（2010版一部）對(duì)黃芪的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，水分  不得過10.0％(附錄Ⅸ H第一法)?？偦曳植坏眠^5.0％(附錄Ⅸ K)。重金屬及有害元素  照鉛、鎘、砷、汞、銅測定法(附錄Ⅸ B原子吸收分光光度法或電感耦合等離子體質(zhì)譜法)測定，鉛不得過百萬分之五；鎘不得過千萬分

28、之三；砷不得過百萬分之二；汞不得過千萬分之二；銅不得過百萬分之二十。照水溶性浸出物測定法項(xiàng)下的冷浸法（附錄Ⅹ A）測定，不得少于17.0％。黃芪甲苷  照高效液相色譜法(附錄Ⅵ D)測定。本品按干燥品計(jì)算，含黃芪甲苷(C41H68O14)不得少于0.040％。毛蕊異黃酮葡萄糖苷  照高效液相色譜法（附錄Ⅵ D）測定。本品按干燥品計(jì)算，含毛蕊異黃酮苷（C22H22O10）不得少于0.02％。<

29、/p><p>　　對(duì)于黃芪配方顆粒劑，現(xiàn)在我國尚未制定統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)均執(zhí)行的是企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。所以，建立黃芪配方顆粒劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，具有迫切性和必要性。</p><p>　　中藥粉末入藥的工藝盡管存在劑量大、粗大黑等問題，但仍然占主要地位。有臨床醫(yī)生在臨床治療中發(fā)現(xiàn)中藥粉末制成的蜜丸，對(duì)于病程較長、辨證較明確者，其療效優(yōu)于湯劑，甚至有不可替代的作用。臨床上有一小部分單味使用的中藥，尤其是貴重藥材，傳

30、統(tǒng)是研末吞服或沖服效果更佳，如人參、三七、紫河車、川貝母、水蛭等。中藥發(fā)展至今，打粉人藥在相當(dāng)程度上仍存在其必要性和不可替代性 因此現(xiàn)代的粉體加工技術(shù)的介入將有廣闊的前景。另一方面．中藥超細(xì)粉體不牽涉到成分及分子結(jié)構(gòu)層面的變化，四氣五味仍存、不悖逆?zhèn)鹘y(tǒng)中醫(yī)藥理論，容易為中醫(yī)藥界及患者所接納[12]。</p><p>　　傳統(tǒng)中藥打粉與中藥超細(xì)粉體都是粉碎加工過程，然而也不盡相同。中藥材打粉一般顆粒大小達(dá)到100μ

31、m，而微米中藥是粉碎到幾個(gè)微米甚至更小。在此尺寸下，除了上面已指出植物細(xì)胞壁破碎產(chǎn)生的效應(yīng)外，顆粒表面積增大，其分散性、吸附能力、表面活性等性能都起了綜合性變化。據(jù)報(bào)道[13]，水蛭最細(xì)粉化，用煎劑一半劑量的抗凝血、抗血栓作用優(yōu)于水蛭絲煎劑，且顏色變淺，腥味降低，質(zhì)地細(xì)膩，利于吞服 中藥超細(xì)粉體除了以散劑吞服外，還可做丸劑、膠囊、片劑(含片、舌面速溶片)、顆粒劑、噴霧劑、貼劑等劑型的原料。據(jù)悉，日本及東南亞有些國家和地區(qū)已將各種中藥材超

32、細(xì)化到30-50μm以下，分別制成沖劑、膠囊、片劑直接服用。由于中藥最細(xì)粉本身帶進(jìn)纖維素、粘液質(zhì)等，在制片或制顆粒時(shí)可少加或免加輔料，制出片劑表面相當(dāng)光亮。再則中藥超細(xì)粉體可進(jìn)一步提取有效成分，提取率高，提取時(shí)間短。粉體加工技術(shù)除了應(yīng)用中藥材加工外，還可對(duì)中藥提取物(干膏、有效成分、單一化學(xué)成分)最細(xì)粉化，尤其是對(duì)難溶性提取物最細(xì)粉化有著更重要意義。無論從加工的深度及應(yīng)用的廣度，還是從提升產(chǎn)品的性能上講，中藥超細(xì)粉體遠(yuǎn)非打粉中藥可比。因

33、此，有專家認(rèn)為， 中藥超細(xì)</p><p>　　范羽豐等[14]通過薄層色譜法分別測定黃連飲片極細(xì)粉、按傳統(tǒng)中藥煮制及沸水沖泡方式制得溶液和黃連常規(guī)飲片傳統(tǒng)中藥煮制法制得的溶液等3種溶液中的小檗堿含量，認(rèn)為中藥飲片極細(xì)粉化形式可能是一些中藥飲片改革比較實(shí)際及合理的方式。陳宇紅[15]通過探討超細(xì)粉碎對(duì)黃芪有效成分溶出的影響，得到結(jié)論：將黃芪進(jìn)行破壁粉碎后，有效成分直接暴露于溶劑中，有利于提取。</p>

34、<p><b>　　參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1] 俞路寧，徐筱芳，邵深深，等.傳統(tǒng)煎法中藥與配方顆粒比較[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，26（5）：784-785.</p><p>　　[2] 杜蕾，伏曉，代大順. 中藥配方顆粒在疾病治療中的優(yōu)勢[J].中醫(yī)研究，2010，24（2）：32-33.</p><p

35、>　　[3] 鐘瑞坤.中藥配方顆粒優(yōu)劣淺析[J].北方藥學(xué)，2011，8（6）：73-74.</p><p>　　[4] 杜毅，孫傳花. 中藥配方顆粒的優(yōu)勢、不足及前景分析[J]. 中國民族民間醫(yī)藥，2011，5（2）：19-20.</p><p>　　[5] 戴啟文,張鴻程,胡娟. 淺談中藥配方顆粒劑與湯劑的比較研究. [J]. 中國民族民間醫(yī)藥，2011，10（2）：18-20.

36、</p><p>　　[6] 沈紅，錢大瑋，段金廒. SPE．HPLC—ELSD法測定黃芪配方顆粒中黃芪甲苷的含量[J]. 中成藥，2006，28（5）：761-762.</p><p>　　[7] 翟旭峰，劉法錦，郭用莊. 薄層掃描法測定黃芪配方顆粒中黃芪甲苷的含量[J]. 中成藥，2006，25（8）：651-652.</p><p>　　[8] 梁德宇.黃芪桂

37、枝五物湯配方顆粒對(duì)手術(shù)后患者免疫功能的影響研究[J]. 山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，11（5）：31-32.</p><p>　　[9] 劉志勤.三種中藥飲片的比較[J]. 中外醫(yī)學(xué)研究，2011，9（10）：96.</p><p>　　[10] 羅文匯.陳皮配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]. 中國藥業(yè)，2011，2（20）：32-33.</p><p>　　[11] 國

38、家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社．2010．</p><p>　　[12]張孝娟，陳長洲，崔景朝．中藥超細(xì)粉體及其在中藥配方顆粒中的應(yīng)用[J]．世界科學(xué)技術(shù)，2002．4（1）：47-49．</p><p>　　[13]呂文海，邱福軍，王作明．炮制與超最細(xì)粉碎對(duì)木蛭藥技影響的初步實(shí)驗(yàn)研究[J]．中國中藥雜志，2001．26（4）：241-243．<

39、/p><p>　　[14]范羽豐，譚蓉，胡曉波．黃連飲片極細(xì)粉化形式的考察[J]．抗感染藥學(xué)，2007．4（3）：114-115．</p><p>　　[15] 陳宇紅．超細(xì)粉碎對(duì)黃芪有效成分溶出的影響[J]．寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2007．29（3）：215-217．</p><p>　　三、課題研究目標(biāo)及主要內(nèi)容、擬采取的研究方案及可行性分析（包括研究目標(biāo)、研究內(nèi)容、研究方

40、案、技術(shù)路線、關(guān)鍵技術(shù)及可行性）；</p><p>　　研究目標(biāo)：通過黃芪三種劑型的質(zhì)量控制對(duì)比研究，分析黃芪配方顆粒、最細(xì)粉這類新劑型的質(zhì)量是否可靠，或是更優(yōu)于傳統(tǒng)中藥飲片，以指導(dǎo)臨床規(guī)范使用，為配方顆粒和最細(xì)粉法定質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的制定提供理論依據(jù)。</p><p>　　研究內(nèi)容：中藥飲片黃芪，又名黃耆，為豆科草本植物蒙古黃芪、膜莢黃芪的根，具有補(bǔ)氣固表、利水退腫、托毒排膿、生肌等功效。黃

41、芪的藥用迄今已有2000多年的歷史，現(xiàn)代研究，黃芪含皂甙、蔗糖、多糖、多種氨基酸、葉酸及硒、鋅、銅等多種微量元素。有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗應(yīng)激、降壓和較廣泛的抗菌作用。為充分發(fā)揮黃芪的多種功效，目前在臨床上已經(jīng)將其開發(fā)成注射劑、片劑等多種機(jī)型進(jìn)行使用，而新開發(fā)的黃芪配方顆粒、中藥最細(xì)粉，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)國家還無法定依據(jù)，大都都是企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。為保證使用的藥物是可靠有效的，擬對(duì)上述兩種劑型與黃芪中藥飲片的質(zhì)量控制進(jìn)行對(duì)比研究，

42、主要采用定性和定量的對(duì)比研究分析方法，評(píng)估其質(zhì)量差異，判別配方顆粒和最細(xì)粉使用價(jià)值，為制定法定的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)。</p><p><b>　　研究方案：</b></p><p><b>　　1.樣品的來源</b></p><p>　?、冱S芪配方顆粒的來源：采用四川綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司所生產(chǎn)的黃芪配方顆粒(

43、規(guī)格為2.5g相當(dāng)于原生藥材10g)。</p><p>　　②黃芪中藥最細(xì)粉的來源：采用瀘州百草堂中藥生產(chǎn)的黃芪最細(xì)粉，規(guī)格為30g/瓶。</p><p>　?、埸S芪中藥藥材的來源：采用我院藥劑科中藥房所提供的蒙古黃芪飲片。</p><p><b>　　2.定性鑒別研究</b></p><p>　　1）不同劑型黃芪甲苷的

44、鑒別：</p><p>　?、冱S芪配方顆粒的樣品制備：取黃芪配方顆粒0.75g（相當(dāng)于原藥材3g），加甲醇20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，

45、作為供試品溶液。</p><p>　?、邳S芪最細(xì)粉樣品的制備：取黃芪最細(xì)粉3g，加甲醇20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。&l

46、t;/p><p>　　③對(duì)照品溶液制備：取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。</p><p>　　薄層色譜條件：照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2µ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜

47、相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)；紫外光燈(365nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。</p><p>　　2）不同劑型，黃芪有效物質(zhì)成分鑒別：</p><p>　?、冱S芪配方顆粒的樣品制備：取黃芪配方顆粒0.5g(相當(dāng)于原藥材2g),加0.3％氫氧化鈉溶液15ml使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，用鋪有適量無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾

48、液蒸干。殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。</p><p>　?、邳S芪最細(xì)粉樣品的制備：取黃芪最細(xì)粉2g，加乙醇30ml，加熱回流20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.3％氫氧化鈉溶液15ml使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，用鋪有適量無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液蒸干。殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。</p><p>

49、;　?、埸S芪藥材樣品的制備：按照上述2.②法制成對(duì)照藥材供試品溶液。</p><p>　　薄層色譜條件：照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10µl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(10:1)作為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。</p><p>　　3.含量

50、測定對(duì)比研究</p><p>　　1）黃芪甲苷含量測定：</p><p>　?、冱S芪配方顆粒的樣品制備：取黃芪配方顆粒1g(相當(dāng)于原藥材4g),精密稱定，加水10ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，以水5

51、0ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得黃芪配方顆粒供試品樣品。</p><p>　?、邳S芪最細(xì)粉樣品的制備：取黃芪最細(xì)粉4g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時(shí)，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4

52、次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得黃芪最細(xì)粉的供試品。</p><p>　　③黃芪飲片樣品的制備：按

53、照上述②法制成黃芪飲片供試品溶液。</p><p>　?、軐?duì)照品溶液的制備 取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。</p><p>　　測定法 精密吸取對(duì)照品溶液10µl、20µl，供試品溶液20µl，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。</p><p>　　色譜條件與系統(tǒng)適用

54、性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(32:68)為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。 </p><p>　　2）毛蕊異黃酮苷含量測定</p><p>　　①黃芪配方顆粒的樣品制備：取黃芪配方顆粒0.25g(相當(dāng)于原藥材1g)，精密稱定，置圓底燒瓶中，加甲醇50ml，稱定重量，加熱回流4小時(shí)，放冷，再稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取

55、續(xù)濾液25ml，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?ml，即得。</p><p>　　②黃芪最細(xì)粉樣品的制備：取黃芪最細(xì)粉1g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加甲醇50ml，稱定重量，加熱回流4小時(shí)，放冷，再稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液25ml，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?ml，即得。</p><p>　　③黃芪飲片樣品的制備：按照上述②法制成黃芪飲片供試品溶液。&

56、lt;/p><p>　?、軐?duì)照品溶液的制備 取毛蕊異黃酮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。</p><p>　　色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)性A，以水（含0.2%甲酸）為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為260nm。</p><p>　　理論板數(shù)按毛蕊異黃酮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。&l

57、t;/p><p>　　測定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。</p><p><b>　　4.技術(shù)路線</b></p><p><b>　　5.關(guān)鍵性技術(shù)</b></p><p>　　本課題研究的關(guān)鍵在于①如何采用正確的方法對(duì)上述樣品進(jìn)行準(zhǔn)確的定性研究，從而

58、可以合理評(píng)判出不同劑型間有效成分之間的差別；②如何采用合理的方法對(duì)上述樣品進(jìn)行精確的定性研究，從而可以比較出不同劑型間有效物質(zhì)成分含量是否具有差異，可初步作為臨床使用的參考，以及為配方顆粒制定法定的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)。</p><p>　　四、課題研究特色及創(chuàng)新點(diǎn)；</p><p>　　研究特色：中藥配方顆粒和中藥最細(xì)粉為近代新研發(fā)出的新劑型，但其臨床療效與傳統(tǒng)中藥飲片的臨床療效是否

59、一致或更優(yōu)，有待進(jìn)一步研究，特別是中藥配方顆粒還處于臨床試用階段。中藥配方顆粒的原材料、產(chǎn)地、提取的工藝等，對(duì)其療效的影響較大，但國家還未制定出法定的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)執(zhí)行的是企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，國家無法監(jiān)控其質(zhì)量。</p><p>　　本課題首次對(duì)黃芪配方顆粒、最細(xì)粉和傳統(tǒng)飲片的三種劑型采用TLC方法、HPLC方法進(jìn)行定性定量差異性研究，同時(shí)對(duì)于三種劑型的對(duì)比研究，尚無相關(guān)研究資料的報(bào)道，具有創(chuàng)新性。</p>

60、;<p>　　創(chuàng)造性的應(yīng)用現(xiàn)代化先進(jìn)制藥分析技術(shù)，將黃芪不同劑型進(jìn)行定量分析，從而為國家制定黃芪最細(xì)粉和黃芪配方顆粒提供了實(shí)驗(yàn)理論數(shù)據(jù)，同時(shí)為臨床合理使用黃芪最細(xì)粉和黃芪配方顆粒提供了藥學(xué)數(shù)據(jù)支持。</p><p>　　創(chuàng)新點(diǎn)：首次對(duì)黃芪最細(xì)粉和黃芪配方顆粒質(zhì)量進(jìn)行了比較研究，運(yùn)用現(xiàn)代先進(jìn)HPLC法，采用蒸發(fā)光散射檢測器測定黃芪甲苷、二項(xiàng)梯度洗脫法測定毛蕊異黃酮苷?，F(xiàn)階段黃芪最細(xì)粉與黃芪配方顆粒均采

61、取的是企業(yè)自定標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)行黃芪最細(xì)粉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只要求檢測黃芪甲苷含量，黃芪配方顆粒則無含量測定項(xiàng)目。通過本課題研究，不但測定了黃芪中最主要成分黃芪甲苷的含量，而且還測定了毛蕊異黃酮苷的含量，由此制定出的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)于現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。為國家制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了理論參考。</p><p>　　五、預(yù)期研究成果（注明成果形式、成果適用范圍及去向、成果數(shù)量、指標(biāo)及其水平等；如系論文，務(wù)請(qǐng)寫明幾篇）；</p><

62、;p>　　本課題研究所得出的結(jié)論，可以評(píng)價(jià)黃芪最細(xì)粉和黃芪配方顆粒的質(zhì)量。本課題研究結(jié)果可為國家建立或提高黃芪不同劑型質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。本課題社會(huì)意義重大，中藥的發(fā)展正處于快速發(fā)展階段，黃芪最細(xì)粉與黃芪配方顆粒的臨床使用量不斷擴(kuò)大，通過本課題研發(fā)成果，可以重新評(píng)定黃芪最細(xì)粉與黃芪配方顆粒的質(zhì)量，指導(dǎo)臨床使用劑量，節(jié)約了社會(huì)資源。黃芪最細(xì)粉國家尚未批準(zhǔn)臨床使用，現(xiàn)處于科研階段。本課題研發(fā)結(jié)果，可以將黃芪最細(xì)粉申報(bào)為院內(nèi)制劑，能為我院

63、創(chuàng)造約5萬元/年的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。通過本課題研發(fā)，可以培養(yǎng)碩士研究生1名，發(fā)表科研論文核心期刊4篇，其科研成果可以申請(qǐng)市級(jí)（學(xué)院級(jí)）科技進(jìn)步獎(jiǎng)。</p><p>　　六、課題已有研究基礎(chǔ)和工作條件（包括與本課題有關(guān)的前期研究狀況、已具備的研究工作條件、申請(qǐng)者及課題組成員承擔(dān)的與本課題研究相關(guān)的科研項(xiàng)目、論文發(fā)表等情況） (內(nèi)容中不得出現(xiàn)所屬部門名稱和課題組成員姓名) ；</p><p>　　1.

64、前期研究狀況：黃芪配方顆粒作為國家新研發(fā)制劑，現(xiàn)處于臨床試用階段；黃芪最細(xì)粉處于科研階段。我院臨床使用量較大，已在臨床上對(duì)療效作出了相應(yīng)的對(duì)比研究。現(xiàn)僅缺少質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面的藥學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。課題組成員在中藥制劑與中藥制劑分析領(lǐng)域進(jìn)行了大量的科研工作，對(duì)GC、HPLC等方法理論及實(shí)驗(yàn)操作均很熟悉，為本課題的實(shí)施奠定了良好的基礎(chǔ)。</p><p>　　2.已具備的研究工作條件：本課題組成員中藥、西藥、醫(yī)師結(jié)合，專業(yè)結(jié)構(gòu)合理

65、，其中高級(jí)職稱2人，碩士研究生3人，其他專業(yè)技術(shù)人員2人，科研實(shí)力雄厚，且具有相當(dāng)?shù)那捌诠ぷ骰A(chǔ)和經(jīng)歷。本課題實(shí)驗(yàn)具有HPLC液相色譜儀、SH10型水分測定儀、。實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)有動(dòng)物房及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，藥理教研室，中藥制劑樓。</p><p>　　3.課題組科研成果：</p><p>　　瀘州市科研項(xiàng)目《納溪梔子與其他主產(chǎn)區(qū)梔子有效物質(zhì)基礎(chǔ)含量的比較研究》2006年-2007年,獲瀘州市科技局成果完

66、成者證書,第5完成人。</p><p>　　瀘州醫(yī)學(xué)院課題腎纖康顆粒的工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，2009年-2011（在研）年第3主研。</p><p>　　四川省科技廳項(xiàng)目《巴中梔子規(guī)范化種植及有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究》，在研，第6主研。</p><p>　　七、課題的年度研究計(jì)劃及年度考核指標(biāo)（青年基金1-2年，重點(diǎn)項(xiàng)目、國際合作項(xiàng)目、創(chuàng)新研究群體2-3年，人文社科項(xiàng)目1－1.5

67、年。課題執(zhí)行日期從2011年1月1日起開始計(jì)算。內(nèi)容中不得出現(xiàn)所屬部門名稱和課題組成員姓名）；</p><p>　　2012年1月—2012年6月 查找參考文獻(xiàn)，制訂試驗(yàn)過程</p><p>　　2012年6月—2012年12月 購買藥材、試劑，作前期準(zhǔn)備工作</p><p>　　2013年1月—2013年2月 進(jìn)行定性薄層色譜鑒別</p

68、><p>　　2013年3月—2013年7月 進(jìn)行HPLC含量測定定量分析</p><p>　　2013年8月—2013年9月 收集整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，撰寫及發(fā)表論文</p><p>　　2013年10月—2013年12月 組織科研結(jié)果，并請(qǐng)獎(jiǎng)八、經(jīng)費(fèi)預(yù)算（單位：萬元）</p><p><b>　　九、課題基本情況<