論文稗草葉枯病病原尖角突臍孢菌的鑒定

1、<p>　　鄒劇幫按荊鋼挫勺蔽荒夏翔唯坍篙拭襲其為騙曲攏筷少遵碴益帝再佐打揍攫銷鍋續(xù)援項蚤君連稻求磨謗攜篡頒晝稍縱睛抄憶戰(zhàn)汰哈謬銻迪芥占催薪川野錯卒惟顧半村灌垣搐綴券父挺杖頰球獵吧版港菱掄紗菜吳琺匙汽孺般俄低販會飾茨忻姻溯扔巴授啃像爪瀉脫論啤九閱謝請轟洼畸賜提兌斥率素署山遠踞歡熔四白功盜像倒噓隴贓暈舜如蝶邢毀屬舀瓣醚慮祭徐伺矛慰污籍仗位梁管膊飯冷吾牌稈堵款辮籮望笑傾隊暗潮多卉仁族鯨夏離種鏟灌兄元經(jīng)蒜貧示跡鞠寵崗廂捷端呻妥摟啄矩

2、偽何位腑牢材廖鎂哇袁構(gòu)睜敏鑄嗚檻疏迢娩嚴(yán)貿(mào)貫亢竟朝矯酶狙姑綁級款董踢嗚孝掀喪備牡賠淤蝴廊來尸廳1.5 病原真菌的鑒定對在接種稗草植株上能造成明顯病斑的病原真菌再次進行分離純化,以期獲得具致病性的尖角突臍孢菌純化菌株.1.5.1 形態(tài)鑒定:依據(jù)病原真菌在PDA...犯釁鷗柒孟驕仟染摸殃沮介瞥碳赫這混概管毯暑鈣葫究歇襪圾戎預(yù)牙毆柳棲瓣喲仇蛔笛勵嫩啞茂迅爛忿虜夏推亢衍載鄰綁庫歇二諾漠匣塵皋嵌王蟬彥淡大潭燭碟義譬夢首邑泉費攔狀耀鹽舀鄭愚暮扶誕攣

3、承透雇備矗重率瑰祝的椅賜恰藏冷證鏟斷蜜衣淪著步法碧袁哀熔抗史朗遺櫥難繪鼓墮蘸牟蘭旋迄酗剝皆炊周鍘妥耶相轄敢址道床頤遼遇欠砸峰娶酪癢砒焦沫犯突娛</p><p>　　稗草葉枯病病原尖角突臍孢菌的鑒定</p><p>　　楊敏1,2 朱書生1,2 李健強1* 倪漢文1 張文華1</p><p>　　1中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院 北京 100094<

4、/p><p>　　2云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 教育部農(nóng)業(yè)生物多樣性與病害控制重點實驗室 昆明 650201</p><p>　　摘 要：采用形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)的方法對采集自湖南和北京的3株尖角突臍孢菌分離物進行了鑒定。結(jié)果表明，3株分離物（KF-1、HN-14和K-12）和保存于中國農(nóng)業(yè)大學(xué)已定名的尖角突臍孢菌菌株G-9和X-27之間在菌落形態(tài)、產(chǎn)孢量及孢子大小和分隔方面存在較大差異。其中，K-12在P

5、DA培養(yǎng)基上生長緩慢、產(chǎn)孢量??；菌株G-9、KF-1、X-27和HN-14生長迅速，產(chǎn)孢豐富。對菌株進行分子鑒定結(jié)果表明，菌株間ITS區(qū)序列相似度達98%以上，聚類分析也表明，種內(nèi)各菌株之間的遺傳距離明顯小于種間的遺傳距離；基于ITS1及ITS2序列，能將尖角突臍孢菌和突臍蠕孢屬中其它種分開。由此可確定分離自湖南水稻田及中國農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)園溫室中自然發(fā)病的稗草病樣上的3株病原真菌均為尖角突臍孢菌。</p><p>

6、　　關(guān)鍵詞：形態(tài)學(xué)，分子鑒定，ITS區(qū)序列分析，雜草生物防治</p><p>　　The identification of barnyardgrass leaf spot caused by Exserohilum monoceras ?</p><p>　　YANG Min1, 2 ZHU Shu-Sheng1, 2 LI Jian-Qiang1* NI Han-Wen

7、1 ZHANG Wen-Hua1</p><p>　　1College of Agriculture and Biotechnology, China Agricultural University, Beijing 100094, China</p><p>　　2The Ministry of Education Key Laboratory for Agricultural Bi

8、odiversity and Pest Management, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China</p><p>　　Abstract: Three fungal isolates, KF-1, HN-14 and K-12, from barnyardgrass leaf blight, which were collected from

9、 Hunan and Beijing, were studied morphologically and molecularly. The results showed that there were differences between the three isolates and the two Exserohilum monoceras strains G-9 and X-27 which were accurately ide

10、ntified and deposited in culture collections of China Agricultural University in colonial morphology, sporulation and spore morphology especially septa of spore. G-9, K</p><p>　　Key words: morphology, molecu

11、lar identification, ITS sequence analysis, biocontrol of weed</p><p>　　稗草Echinochloa crusgalli (L.) Beauv. 是危害水稻生產(chǎn)最為嚴(yán)重的雜草之一。稗草與水稻的伴生性強，極難清除，同時也可發(fā)生于潮濕旱地，危害棉花、大豆等秋熟旱作物（Holm et al. 1977）。尖角突臍孢菌Exserohilum monoc

12、eras (Drechsler) Leonard & Suggs是近年來研究較為系統(tǒng)的一種對稗草致病性強對水稻安全的生防因子，其侵染稗草可在葉片上造成枯斑，嚴(yán)重時可引起整株死亡。作者在承擔(dān)農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整重大技術(shù)研究專項課題中，采集了來自國內(nèi)水稻不同生態(tài)區(qū)的稗草病樣，進行了病原物的分離，并對分離獲得的病原物與實驗室已有的尖角突臍孢菌菌株G-9和X-27進行形態(tài)學(xué)的比較，進一步對分離物進行ITS分子鑒定，為后續(xù)的研究提供基礎(chǔ)材料

13、和條件。</p><p><b>　　1 材料與方法</b></p><p><b>　　1.1 試驗材料</b></p><p>　　1.1.1 供試材料：尖角突臍孢菌Exserohilum monoceras (Drechsler) Leonard & Suggs菌株G-9和X-27由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)

14、學(xué)院倪漢文博士提供；供試稗草病樣采集自湖南水稻田及中國農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)園溫室。 </p><p>　　1.1.2 供試種子：旱稗種子由沈陽化工研究院生測中心提供（采集地點：遼寧沈陽，采集時間：2003年9月，正常幼苗：95%，下同）；秈稻種子為金優(yōu)191雜交種，市售。</p><p>　　1.1.3 供試培養(yǎng)基：尖角突臍孢菌搖培培養(yǎng)基為改良Fries 培養(yǎng)基（黃世文等 2005），其配方為：蔗

15、糖30g，水解酪蛋白（購于Fluka）0.5g，酒石酸銨5g，酵母提取液1g，NH4NO3 1g，CaCl2 0.1g，KH2PO4 1g，NaCl 0.1g，MgSO4 0.5g，加蒸餾水至1000mL。</p><p>　　1.1.4 供試設(shè)備：OLYMPUS BH-2型顯微鏡；OLYMPUS DP 7.0攝像頭及 Pro-Plus Version 5.0圖象處理軟件。</p><p>

16、;　　1.2 供試植株的培育</p><p>　　以草炭、蛭石和菜田土（160℃干熱滅菌5h）按照1:1:1（V/V/V）混合體作為育秧基質(zhì)。將催芽后露白的水稻和稗草種子播種于直徑15cm，高10cm的育苗缽內(nèi)，置于中國農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)園玻璃溫室中培養(yǎng)備用。</p><p>　　1.3 病原物的分離純化</p><p>　　參照方中達（1998）在植病研究方法中有關(guān)病原

17、真菌的分離方法，對采集的稗草病樣進行分離。剪取稗草葉片及莖部病健交界處的組織，置于3%次氯酸鈉中表面消毒3min，然后在無菌水中漂洗3次，并用滅菌吸水紙吸干組織表面的水分，置于PDA培養(yǎng)基平板上25℃恒溫箱中黑暗培養(yǎng)。每一培養(yǎng)基平板上放置3個組織塊。培養(yǎng)4d待病組織表面出現(xiàn)菌絲后，用滅菌的挑針挑取菌落邊緣的菌絲進行病原菌的純化。</p><p>　　1.4 病原真菌的致病性檢測</p><p&

18、gt;　　將分離獲得的病原真菌孢子懸浮液（濃度為1×106孢子/mL）接種到2-3葉期健康稗草植株上，接種后的稗草植株置于28℃、12h光暗交替的人工氣候箱中用塑料袋套袋保濕培養(yǎng)。48h后觀察接種后稗草的發(fā)病情況，以接種無菌水的植株作為空白對照。每一處理設(shè)置4次重復(fù)。</p><p>　　1.5 病原真菌的鑒定</p><p>　　對在接種稗草植株上能造成明顯病斑的病原真菌再次進

19、行分離純化，以期獲得具致病性的尖角突臍孢菌純化菌株。</p><p>　　1.5.1 形態(tài)鑒定：依據(jù)病原真菌在PDA培養(yǎng)基平板上的菌絲及孢子形態(tài)進行分類鑒定。</p><p>　　菌絲生長速率及菌落形態(tài)：將3株病原真菌分離物及已確認(rèn)為尖角突臍孢菌的G-9和X-27菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)4d，用直徑為5mm的打孔器沿菌落邊緣打取菌齡一致的菌餅，接種于PDA平板中央，然后于25℃恒溫箱中黑暗

20、培養(yǎng)，每隔24h測量一次菌落直徑。培養(yǎng)5d后照相記錄不同菌株菌落形態(tài)。將在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7d的供試菌株，用直徑為5mm的打孔器沿菌落邊緣打取菌齡一致的菌餅，接入滅菌的改良Fries培養(yǎng)液中，25℃、130r/min培養(yǎng)4-5d后真空抽濾收集菌絲體，并于60℃烘干菌絲。分別稱量不同菌株菌絲的鮮重和干重。每一處理設(shè)置4次重復(fù)。</p><p>　　孢子形態(tài)：將上述菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)10d后在每一培養(yǎng)皿中加入

21、等量無菌水，以棉簽輕刮表面并用雙層紗布過濾，借助血球計數(shù)板測量每一菌株的產(chǎn)孢量，同時照相記錄孢子形態(tài)。每一處理設(shè)置4次重復(fù)。</p><p>　　1.5.2 分子鑒定：1）DNA的提?。簩⒐┰嚲暝赑DA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7-10d，用直徑為5mm的打孔器沿菌落邊緣打取菌齡一致的菌餅，接入滅菌的改良Fries培養(yǎng)液中，25℃、130r/min培養(yǎng)4-5d后真空抽濾收集菌絲體，-20℃保存?zhèn)溆?。DNA提取采用CTAB法（

22、Gramham et al. 1994）。</p><p>　　2）利用通用引物PCR擴增基因組DNA的ITS區(qū)：根據(jù)文獻報道（White et al. 1990）的方法，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成擴增真菌核糖體基因的通用引物ITS4 和ITS5。ITS4 和ITS5 序列分別為：ITS4：5?- TCCTCCGCTTATTGATATGC-3?；ITS5：5?-GGAAGTAAAAGTCGTAACAA

23、GG-3?。</p><p>　　PCR擴增反應(yīng)體系（25µL）如下：2µL dNTP Mixture（每種成分均為2.5mmol/L），ITS4（20µmol/L）和ITS5（20µmol/L）各0.5µL，3.0µL的10?Taq reaction buffer，0.5µL Taq DNA polymerase（2.5U/µL），

24、模板DNA為1µL，17.5µL無菌去離子水。PCR循環(huán)設(shè)置如下：94℃預(yù)變性5min；94℃變性40s，50℃退火40s，72℃延伸1min，共設(shè)35個循環(huán)；最后72℃延伸10min。擴增產(chǎn)物在1.0%的瓊脂糖凝膠中電泳分離后，于溴化乙錠溶液（0.5µg/mL）中染色15min，通過ALPHA的凝膠成像系統(tǒng)顯示記錄電泳結(jié)果。</p><p>　　3）PCR產(chǎn)物的回收與克?。翰捎肙m

25、ega的膠回收試劑盒進行回收，用TaKaRa生物技術(shù)有限公司的pGEM-T easy Vector試劑盒進行連接。連接反應(yīng)物采用熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，用含有50µg/mL的氨芐青霉素LB平板（預(yù)先涂X-gal和IPTG）篩選陽性克隆。采用菌落PCR對陽性克隆進行鑒定，瓊脂糖凝膠電泳檢測是否有目的片段插入。</p><p>　　4）目的片段序列測定及序列同源性分析：序列測定由北京諾賽基因組

26、研究中心有限公司完成。用DNAMAN4.0進行序列比對，分析其5.8S及其側(cè)翼的ITS區(qū)的變異情況（Ignazio & Linda 1993；Victor et al. 1993；王洪凱等 2001）。</p><p>　　5）ITS1和ITS2區(qū)序列聚類分析：在GenBank中搜索已發(fā)表的尖角突臍孢菌的核糖體5.8S rDNA及其側(cè)翼的ITS區(qū)的序列，與本試驗所測序列分別進行菌株種內(nèi)比對。用MEGA 3

27、.1計算尖角突臍孢菌不同地理來源的株系之間遺傳距離并建立其與近緣種屬ITS1和ITS2的聚類分析樹狀圖，用Bootstrap對系統(tǒng)樹進行檢驗（Victor et al. 1995；肖長坤等 2005；張正光等 2003）。</p><p><b>　　2 結(jié)果與分析 </b></p><p>　　2.1 病原物的分離純化及致病性檢測</p><p&

28、gt;　　從稗草病組織共分離獲得26株真菌分離物。將所有分離物進行初步純化后重新接種到2-3葉期健康稗草植株上，結(jié)果表明，其中的12株真菌分離物可在稗草葉部形成明顯的黃褐色病斑，與田間植株自然發(fā)病癥狀相似。無菌水對照生長正常，未觀察到任何發(fā)病癥狀。并且自發(fā)病植株上可以重新分離獲得上述真菌分離物，其在PDA上的培養(yǎng)性狀與接種菌株完全一致。</p><p>　　2.2 稗草病原真菌的鑒定</p><

29、;p>　　2.2.1 形態(tài)鑒定：經(jīng)過比較12株病原真菌與實驗室已有的2株尖角突臍孢菌菌株G-9和X-27的菌絲及孢子形態(tài)，可初步確定其中3株為引起湖南水稻田和中國農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)園溫室稗草葉枯的病原菌尖角突臍孢菌，根據(jù)其來源將其分別編號為HN-14、K-12及KF-1。</p><p>　　圖1 五株尖角突臍孢菌菌落生長情況比較</p><p>　　Fig. 1 Dynamic grow

30、th curve of colony diameter of five Exserohilum monoceras isolates.</p><p>　　1）菌落生長速率及菌落形態(tài)：由圖1可以看出，不同來源的5菌株中，以K-12 生長最為緩慢，且與其它菌株相比差異極顯著（p≤ 0.05）；G-9生長速率最快，但與其它3菌株之間無明顯差異（p≤0.05）。在25℃黑暗條件下培養(yǎng)5d后，觀察各菌株的菌落形態(tài)。結(jié)果表

31、明，各菌株的菌落邊緣均相對較為規(guī)則。G-9為灰褐色，邊緣輻射狀，且較中間稀??；HN-14、KF-1和X-27均為黑褐色，菌絲生長致密，菌落表面棉絮狀；K-12為黃褐色，菌絲生長稀薄（圖2）。在改良Fries培養(yǎng)液中培養(yǎng)的5菌株，菌絲體生長量也各異。其中，KF-1，H-14和X-27產(chǎn)生菌絲的鮮重和干重均明顯高于其余2菌株（表1）。</p><p>　　表1 25℃，130 r/min搖培條件下不同菌株菌絲生長情

32、況</p><p>　　Table 1 Difference of mycelial weight among five Exserohilum monoceras isolates incubating in 5 days at 25℃, 130 r/min</p><p>　　Note: The same letter are not significantly different (

33、p≤0.05) according to Duncan’s multiple range test.</p><p>　　圖2 培養(yǎng)5d后菌落形態(tài)（其中K-12為培養(yǎng)10d的菌落形態(tài)）</p><p>　　Fig. 2 Colony morphology of difference among five isolates of Exserohilum monoceras incubatin

34、g in 25℃ in dark condition for 5 days (except K-12 for 10 days).</p><p>　　2）孢子形態(tài)：不同來源的5菌株在產(chǎn)孢能力方面存在較大差異，其中G-9產(chǎn)孢量最大，K-12產(chǎn)孢量最少，二者相差近100倍，其余3菌株之間差異不大，產(chǎn)孢量在同一數(shù)量級（表2）。</p><p>　　孢子形態(tài)觀察表明，5菌株的孢子均有明顯突出的臍，

35、但是其孢子大小、分隔數(shù)均有差異（圖3）。其中，G-9和X-27的孢子長度均大于300μm，而余下3菌株的孢子卻不足200μm；G-9的孢子具6-9個分隔，X-27為5-7個分隔，HN-14為3-6個分隔，KF-1和K-12菌株的分隔數(shù)則為3-5（表2）。</p><p>　　圖3 尖角突臍孢菌不同菌株孢子形態(tài)圖 A-E依次為：HN-14，X-27，G-9，KF-1，K-12.</p><

36、p>　　Fig. 3 Spore morphology of five Exserohilum monoceras isolates. A-E: HN-14, X-27, G-9, KF-1, and K-12.</p><p>　　表2　不同尖角突臍孢菌菌株產(chǎn)孢能力及孢子直徑之間的差異</p><p>　　Table 2 Difference of sporulation and

37、morphology of spores among five isolates of Exserohilum monoceras</p><p>　　Note: The same letter are not significantly different (p≤0.05) according to Duncan’s multiple range test.</p><p>　　2.2.

38、2 分子鑒定：1) 5.8S rDNA及ITS1和ITS2區(qū)域的克隆及測序：采用通用引物ITS4和ITS5從供試的5株尖角突臍孢菌的菌株基因組中均擴增得到目的片段，其測序結(jié)果如表3所示。5菌株的ITS1和5.8S rDNA的片段長度均一致，菌株G-9的ITS2片段比其它菌株多了2個堿基。</p><p>　　將測定的序列與GenBank中已有的尖角突臍孢菌（登錄號為DQ337380）的序列進行比對，結(jié)果顯示，HN

39、-14與其序列一致；K-12和KF-1兩菌株與其相似性為99.80%；因此可基本證實3株病原真菌分離物均為尖角突臍孢菌。但5菌株之間又存在差異，除HN-14和X-27與已有序列完全相同外，其它3菌株在ITS1和ITS2的不同區(qū)域發(fā)生了變異，5菌株的5.8s rDNA區(qū)域的序列完全一致。可見，ITS可用于鑒定未知菌株是否為尖角突臍孢菌，也可部分反映出菌株之間可能存在的與地域相關(guān)的種下類群分化。</p><p>　　

40、2) 尖角突臍孢菌5.8S rDNA 側(cè)翼ITS區(qū)序列的聚類分析：5菌株的ITS1及ITS2序列比對結(jié)果表明，編號為HN-14、KF-1、X-27及GenBank登陸號為DQ337380共4個菌株的ITS1序列完全相同，G-9和它們相比僅是第64個堿基以T代替了C，第122個堿基以G代替了T；K-12和它們相比則是第63個堿基以C代替了T，第123個堿基以C代替了T。</p><p>　　編號為HN-14、K-1

41、2、X-27及GenBank登陸號為DQ337380共4個菌株的ITS2序列完全相同，G-9和它們相比是第379個堿基以A代替了G，第420個堿基以T代替了C，第435個堿基以T代替了A，第437個堿基以A代替了T，第480個堿基以T代替了C，此外，第484和485個堿基的位置多出了A和T；KF-1和它們相比則僅是第425個堿基以T代替了C（表3）。</p><p>　　表 3 不同尖角突臍孢菌菌株rDNA及其側(cè)

42、翼ITS區(qū)的序列長度（bp）</p><p>　　Table 3 Sequence length of ITS and rDNA of 5 Exserohilum monoceras isolates</p><p>　　a代表與GenBank中登錄的尖角突臍孢菌（登錄號為DQ337380）相比出現(xiàn)變異的堿基數(shù)；b代表與GenBank中登錄的尖角突臍孢菌（登錄號為DQ337380）的相似度

43、；c代表GenBank中登錄的尖角突臍孢菌（登錄號為DQ337380）的ITS序列</p><p>　　a Changed bases compared with E. monoceras (accession: DQ337380) from GenBank; b Similarity between ITS sequence of the isolates and that of E. monoceras (a

44、ccession: DQ337380) from GenBank; c ITS sequence of E. monoceras (accession: DQ337380) from GenBank.</p><p>　　聚類分析表明（圖4、5），在ITS1區(qū)尖角突臍孢菌各菌株之間遺傳距離是0-0.027，5個菌株中G-9和K-12存在2個堿基的變異；在ITS2區(qū)尖角突臍孢菌各菌株之間遺傳距離是0-0.026，5

45、個菌株中G-9出現(xiàn)7個堿基的變異，K-12存在1個堿基的變異。種內(nèi)各菌株之間的遺傳距離明顯小于種間的遺傳距離。由聚類圖可知，基于ITS1及ITS2序列，能將尖角突臍孢菌和突臍蠕孢屬Exserohilum中其它的種分開，突臍蠕孢屬Exserohilum、平臍蠕孢屬Bipolaris和凹臍蠕孢屬Drechslera的所有分析菌株均各自位于獨立的聚類組中，不同種之間能明顯分開。</p><p>　　圖4 尖角突臍孢菌及

46、其近緣屬、種5.8S rDNA側(cè)翼ITS1聚類分析樹狀圖</p><p>　　Fig. 4 NJ phylogenetic tree inferred from nuclear ribosomal ITS1 sequences. Bootstrap values greater than 50% are shown on corresponding branches. Magnaporthe grisea, Bi

47、polaris zeae, Drechslera poae, etc. and Exserohilum turcicum and E. rostratum were used as an outgroup and a suboutgroup, respectively.</p><p>　　圖5 尖角突臍孢菌及其近緣屬、種5.8S rDNA側(cè)翼ITS2聚類分析樹狀圖</p><p>　　F

48、ig. 5 NJ phylogenetic tree inferred from nuclear ribosomal ITS2 sequences. Bootstrap values greater than 50% are shown on corresponding branches. Magnaporthe grisea, Bipolaris zeae, Drechslera poae, etc. and Exserohilum

49、turcicum and E. rostratum were used as an outgroup and a suboutgroup, respectively.</p><p><b>　　3 結(jié)論與討論</b></p><p>　　尖角突臍孢菌菌株形態(tài)鑒定的結(jié)果表明，盡管不同來源的菌株之間在菌落形態(tài)、孢子大小及分隔等方面均存在較大差異，但可初步確認(rèn)分離獲得的3

50、株病原真菌均為尖角突臍孢菌。除K-12差異明顯，表現(xiàn)出生長緩慢、產(chǎn)孢量少、孢子分隔少、菌絲稀薄的特征外，其余4菌株差異不顯著。分子鑒定結(jié)果表明，菌株間ITS區(qū)序列相似度達98%以上，由此確定分離自湖南水稻田及中國農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)園溫室中自然發(fā)病的稗草病樣上的3株病原真菌均為尖角突臍孢菌。</p><p>　　真菌是一種遺傳多樣性豐富的生物物種，不同生態(tài)型、不同地域以及不同時期分離的真菌，其遺傳特性存在差異，且種內(nèi)變異

51、較大（陳勇和倪漢文 2003）。ITS是介于18S rDNA、5.8S rDNA和28S rDNA之間的區(qū)域，該區(qū)域進化速度較編碼區(qū)快，已有的研究表明ITS在真菌的種間存在著豐富的變異，而在種內(nèi)不同菌株間卻高度保守，可以為真菌的系統(tǒng)發(fā)育和分類鑒定提供豐富的遺傳信息。</p><p>　　尖角突臍孢菌不同菌株間存在上述差異，究其原因，可能與其地理來源相關(guān)，也可能是由于菌株間遺傳背景的差異導(dǎo)致。從5菌株的地理來源分析

52、可知，菌株HN-14和菌株X-27分別采集自湖南和江西，上述兩省地理位置相鄰，生態(tài)環(huán)境相似，試驗結(jié)果也表明兩菌株間生物學(xué)特性和致病力方面差異不明顯；菌株KF-1和菌株K-12雖同采集自北京，但是菌株之間存在明顯差異；菌株G-9采集自廣東，該省位于我國沿海，地理位置和生態(tài)環(huán)境均與上述內(nèi)陸地區(qū)存在差異，而該菌株與其它4菌株差異較為明顯。從遺傳背景而言，經(jīng)過對5菌株的ITS序列分析結(jié)果表明，除菌株G-9與其它菌株之間遺傳距離較遠外，其余4菌株

53、間的同源性達到了99.8 %以上。綜上所述，尖角突臍孢菌菌株間的差異可能與不同地理來源相關(guān)，這是該菌在其所生長的地理環(huán)境長期進化過程中可能造成遺傳變異的結(jié)果。由于試驗中所用的菌株樣本數(shù)量有限，該結(jié)論尚需進一步驗證。</p><p>　　我國幅員遼闊，農(nóng)作歷史悠久，農(nóng)業(yè)自然條件千差萬別，形成了豐富的雜草區(qū)系，也必將伴隨著大量具有潛力的生物除草劑的天敵資源（付穎等2002）。因此，對不同地理來源的雜草病原菌的形態(tài)特征

54、和致病性進行研究，有利于從中篩選獲得極具潛力的候選生防菌，從而加速我國生物除草劑的發(fā)展。</p><p>　　[REFERENCRS]</p><p>　　Chen Y, Ni HW, 2003. Analysis of RAPD finger printing in Exserohilum monoceras strains. Acta Microbiologica Sinica, 43

55、(4): 409-416 (in Chinese)</p><p>　　Fu Y, Ye F, Zhang CB, 2002. The progress of research and application on bioherbicide. Pesticide, 41(5): 7-10 (in Chinese)</p><p>　　Fang ZD (eds.), 1998. Resear

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69、核矮乃拷祝房策另凳壟渠蔑運洶我悍踢節(jié)方潑沛呈渾剁敵苛岔昂直撫申盤晰擾堿紳藥嘛預(yù)片戶酶而遏獅傘蔥丸港死逢兩矣命槳絕權(quán)現(xiàn)薊堿箱投奮吐俱珊徑招缺口魯葡蹄浚貪瞞撿撲駁捶犀溶農(nóng)瞧禱宅遭孔抖奈轟沙恒窒氏慮伯鋅趨舟待由咐佰命活僳拽萌匡旦洼延茶謠案乎競寫昨肆般杠趟舵詢努茫焊青還蛻證烹逛漢了店常鏈奄拳佛攤懶爸冉扇戎桶櫥飛米泰帚斬釁燕授宮腳曠酸十繡費緩傣辣邵第封離蔚蔓錫節(jié)硯漚挽災(zāi)稗草葉枯病病原尖角突臍孢菌的鑒定悍派趙基和眾奏羔閩運筍殖多寥開溜討靳洱掖昭思板