基于分子標(biāo)記的鐵皮石斛種質(zhì)資源遺傳多樣性研究.pdf

1、鐵皮石斛是我國珍稀藥材,了解種質(zhì)資源遺傳多樣性,有助于選育優(yōu)良新品種、合理利用和保護(hù)種質(zhì)資源。采用SCoT和SSR標(biāo)記技術(shù),建立鐵皮石斛SCoT-PCR、SSR-PCR反應(yīng)體系。分析鐵皮石斛遺傳多樣性,結(jié)果如下:
　　 1、通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和單因素實(shí)驗(yàn)相結(jié)合,建立鐵皮石斛SCoT-PCR最佳反應(yīng)體系（20μL）:DNA模板30ng,Mg2+2.5mmol·L-1、dNTPs0.15mmol·L-1、Taq酶1.5U、引物0.4μ

2、mol-l·L-1。PCR擴(kuò)增程序:94℃,5min;94℃,35s,51℃,35s,72℃,1.5min,35個(gè)循環(huán);72℃,10min,SCoT標(biāo)記在32份鐵皮石斛材料的驗(yàn)證中表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。
　　 利用SCoT分子標(biāo)記對鐵皮石斛個(gè)體和居群進(jìn)行遺傳多樣性和聚類分析,從57條SCoT引物中篩選出28條引物,共擴(kuò)增出385條帶,其中366條為多態(tài)性條帶,多態(tài)性比率(PPB)94.76％;17個(gè)居群的多態(tài)位點(diǎn)(PPL

3、)在28.83％～64.42％,平均為45.73％,聚類結(jié)果表明不同來源的鐵皮石斛聚在一起,但有例外,說明鐵皮石斛種質(zhì)具有豐富的遺傳多樣性。
　　 2、鐵皮石斛SSR-PCR最佳反應(yīng)體系（20μL）:Mg2+1.5mmol·L-1、引物0.6μmol.L-1和dNIPs0.40mmol·L-1、TaqDNA聚合酶0.5U、模板DNA40ng;SSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序:95℃,Smin,95℃,35s,(41-58.1)℃,35

4、s,72℃,1.5min,35個(gè)循環(huán);72℃,10min;利用該反應(yīng)體系對95份鐵皮石斛進(jìn)行SSR-PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增譜帶多態(tài)性豐富。
　　 利用SSR分子標(biāo)記對鐵皮石斛個(gè)體和居群進(jìn)行遺傳多樣性和聚類分析,從26個(gè)SSR引物中篩選出10對引物,共擴(kuò)增出63條帶,其中61條為多態(tài)性條帶,多態(tài)性比率(PPB)97.00％;17個(gè)居群的多態(tài)位點(diǎn)(PPL)在11.11％～90.48％,平均為53.22％。聚類結(jié)果表明鐵皮石斛遺傳多態(tài)性豐富

5、,居群間遺傳差異較大。
　　 3、將SCoT和SSR標(biāo)記相結(jié)合對17個(gè)居群的鐵皮石斛進(jìn)行遺傳多樣性分析,結(jié)果表明鐵皮石斛遺傳多樣性主要分布于居群間,鐵皮石斛種質(zhì)的親緣關(guān)系與其地理緯度具有顯著的相關(guān)性。聚類結(jié)果表明,SCoT和SSR標(biāo)記相結(jié)合能夠更明確了不同來源的鐵皮石斛種質(zhì)資源的親緣關(guān)系和地理緯度關(guān)系密切。更進(jìn)一步證明了SCoT和SSR標(biāo)記對鐵皮石斛遺傳多樣性、親緣關(guān)系分析的可靠性,為鐵皮石斛品種的選育、引種和推廣提供了可靠的理