豬H3K9乙酰化修飾及其對FSHR表達(dá)調(diào)控的影響.pdf

1、卵泡刺激素(FSH)是由動物垂體前葉嗜堿性細(xì)胞合成和分泌的一種糖蛋白類促性腺激素，是促進(jìn)和維持性腺正常發(fā)育和生殖功能的重要激素.FSH的生理功能是通過分布于性腺上的特異性受體—卵泡刺激素受體(FSHR)所介導(dǎo)的。FSH受體的表達(dá)要受許多旁分泌/自分泌的因素或者啟動子區(qū)域調(diào)控元件調(diào)節(jié)的影響。因此，研究包含調(diào)控元件在內(nèi)的FSHR基因5'側(cè)翼區(qū)域是很重要的。人們已經(jīng)克隆出很多物種的FSHR的啟動子區(qū)，包括人，大鼠，小鼠和羊，關(guān)于豬的FSHR啟

2、動子區(qū)的研究還很少。
　　 染色體是由核小體組成的。核小體上組蛋白的表觀遺傳修飾可以改變基因的表達(dá)，而且越來越引起人們的關(guān)注。有研究指出，雄性動物中的FSHR的組蛋白甲基化的修飾可以引起基因表達(dá)的改變.關(guān)于乙?；覀兛梢岳萌旧|(zhì)免疫沉淀技術(shù)來研究其與FSHR表達(dá)調(diào)控之間的關(guān)系。本實驗結(jié)果主要有:
　　 1.豬FSHR缺失啟動子活性分析
　　 對染色質(zhì)步移得到的FSHR5'區(qū)序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)沒有TATA框，并

3、且生物信息學(xué)分析沒有發(fā)現(xiàn)CpG島。將不同長度的啟動子片段克隆到pGL3-basic質(zhì)粒上。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到顆粒細(xì)胞中。根據(jù)缺失啟動子活性檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，最長的片段P1590，即相對轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)-1557到+32的區(qū)域在顆粒細(xì)胞中的活性與pGL3-Basic載體相比有2.07倍。-1557到-1159的缺失導(dǎo)致其表達(dá)活性是P1590的3.03倍(P＜0.01)。-1159到-562更長片段啟動子的缺失導(dǎo)致其活性相比P1185載體明顯下降。所以從

4、含有核苷酸-1159到-562的片段為啟動子區(qū)重點(diǎn)調(diào)控區(qū)域，可能存在著重要調(diào)控元件。
　　 2.H3K9乙酰化修飾與FSHR基因表達(dá)調(diào)控的相關(guān)性研究
　　 分別通過體內(nèi)實驗和體外實驗來研究H3K9乙?；揎椗cFSHR表達(dá)的關(guān)系。體內(nèi)實驗中，健康卵泡FSHR啟動子區(qū)乙?；奖乳]鎖卵泡中高，F(xiàn)SHR表達(dá)量也比閉鎖卵泡高;體外實驗中，分別用FSH和丁酸鈉來處理顆粒細(xì)胞，可以發(fā)現(xiàn)H3K9乙酰化修飾水平升高，F(xiàn)SHR基因表達(dá)量也