鵝觀草內(nèi)生真菌的高溫去除技術(shù).pdf

1、禾本科植物內(nèi)生真菌通常指epicholae真菌，包括Epichlo(e)屬真菌及其無性型的Neotyphodium屬真菌。Neotyphodium屬真菌通常不給宿主植物帶來任何可見的病癥，并且能夠提高宿主植物多方面的生物學(xué)和非生物學(xué)的抗性。本文研究了鵝觀草/內(nèi)生真菌這一新型共生體的檢測、去除等技術(shù)及基本生物學(xué)特性。
　　 第一，以野外采集的鵝觀草植株和實驗室培育的鵝觀草幼苗為材料，使用染色法和乳酸組織透明法檢測其葉鞘中的內(nèi)生真菌

2、。結(jié)果表明，幼苗中的菌絲體大多平行于細(xì)胞長軸，極少發(fā)生彎曲，而成熟植株中的菌絲體大多呈彎曲狀。在幼苗中，由于菌絲體的生長形態(tài)，組織透明法10％的檢出率，遠(yuǎn)低于染色法的100％。但在鵝觀草成熟植株中，組織透明法的檢出率為90％，高于染色法的75％。乳酸透明法可用于野外采集的鵝觀草中內(nèi)生真菌的檢測。
　　 第二，2010年5月，在南京紫金山地區(qū)收集來自同一鵝觀草植株上的所有種子約3000粒中隨機(jī)選50粒，采用孟加拉紅染色法測得種子含

3、菌率為100％。另各選50粒置于試管中分別于40℃、50℃和60℃水浴處理12～24小時后在實驗室條件下進(jìn)行發(fā)芽，待幼苗長至三片葉時用染色法檢測其中的內(nèi)生真菌。結(jié)果表明，以上溫度處理對鵝觀草種子的發(fā)芽率沒有影響，而22h和24h的50℃處理以及14h到24h的60℃處理可導(dǎo)致種子中的內(nèi)生真菌種傳能力降低。分離該內(nèi)生真菌獲得菌株Rnj0171。結(jié)合形態(tài)學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育學(xué)特征，將菌株Rnj0171鑒定為E.yangziii。
　　 第三

4、，利用野外采集的鵝觀草種子，通過長時間室溫放置和熱處理兩種方法分別構(gòu)建了EI(Endophyte infected)/EF（Endophyte free）鵝觀草體系，調(diào)查了這些植株3年的形態(tài)學(xué)特征。結(jié)果表明，含有菌株Rnj0146的“081植株群“在苗期生長比較旺盛，總分蘗為27～48個，平均34.3個，比EF植株增加約38％。但是，EI植株的株高、莖稈直徑、葉片寬等指標(biāo)與EF植株相比無顯著差異。在第二年和第三年的觀察中，EI與EF植株

5、群沒有顯著差異，但EF植株的千粒重分別為5.15g和5g，都顯著大于EI植株。而菌株Rnj0171對鵝觀草苗期的生長產(chǎn)生了一定的抑制作用，”101植株群”中EF植株的分蘗數(shù)和生殖分蘗數(shù)分別比EI植株增加24％和21％。結(jié)合形態(tài)學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育學(xué)特征，將菌株Rnj0146和Rnj0171分別鑒定為N.sinicum和E.yangzii。
　　 第四，利用實驗室保藏的菌株和含菌鵝觀草的莖稈，探索高溫對內(nèi)生真菌的影響。結(jié)果表明，供試的8株

6、菌都能夠承受30℃和40℃24h的處理，都不能夠承受60℃24h的處理。在50℃24h的處理下，僅菌株Cnja207和菌株P(guān)cs0301仍能存活。經(jīng)過50℃和60℃處理過的鵝觀草莖稈，不能分離出內(nèi)生真菌。這說明高溫是導(dǎo)致了鵝觀草種子中內(nèi)生真菌死亡的原因。
　　 本研究通過熱處理法構(gòu)建的含菌/無菌鵝觀草體系表明，鵝觀草內(nèi)生真菌對宿主植物的影響具有多樣性。內(nèi)生真菌N.sinicum在一定程度上促進(jìn)了宿主植物的生長，而E.yangzi