PCP對土壤微生物區(qū)系影響及其降解菌的篩選.pdf

1、五氯酚（pentachLorophenoL，簡寫為PCP）及其鈉鹽被廣泛應用于木材、皮革的防腐，殺菌，除草，殺蟲，消毒，殺滅釘螺等。在土壤中的殘留量很大，給環(huán)境造成了嚴重的危害。作為一種有毒有害有機物，已被許多國家列入優(yōu)先污染物。因此研究PCP與土壤微生物的生態(tài)關系對了解PCP在環(huán)境中的代謝遷移以及研究PCP的生物降解都有重要的意義。 文章利用平板分離培養(yǎng)和16sRNA基因片段擴增研究PCP對土壤微生物的影響。首先用平板培養(yǎng)的方

2、法研究了PCP對可培養(yǎng)微生物的影響。試驗得出， PCP對土壤微生物的數量有很大的影響：在100 mg·Kg-1，200 mg·Kg-1，500 mg·Kg-1時，對細菌有生長刺激作用，細菌數量上升很快，且持續(xù)時間比較長。在1000 mg·Kg-1時，開始時細菌的生長有刺激作用，細菌數量有所增加，但隨著時間延長，細菌數量開始下降，下降趨勢比較大，最后甚至低于對照。在100mg·Kg-1，200mg·Kg-1時，PCP對放線菌有微弱的生長刺

3、激作用，在500mg·Kg-1，100mg·Kg-1時，PCP對放線菌有強烈的抑制作用，放線菌的數量遠低于對照土壤。真菌對于PCP的處理十分敏感，任何濃度處理下真菌的數量都低于對照。雖然隨著時間延長，真菌數量略有上升，但仍低于對照。這表明PCP對真菌具有強烈的毒性。土壤酶是土壤組分中最活躍的有機成分之一，土壤酶和土壤微生物一起共同推動土壤的代謝過程。故在檢測微生物數量的同時，也測定了幾種土壤酶的酶活。結果表明，PCP對脲酶有較強的抑制作

4、用，各處理脲酶酶活力均低于對照。在100 mg·Kg-1，200 mg·Kg-1時，PCP對磷酸酶有刺激作用，導致磷酸酶酶活力上升，在500 mg·Kg-1，1000 mg·Kg-1時，開始時磷酸酶酶活力有所下降，但隨后酶活力又開始上升，并且高于對照。在100 mg·Kg-1，200 mg·Kg-1時，蛋白酶酶活力于對照相差不大，在500 mg·Kg-11000 mg·Kg-1時，蛋白酶酶活力遠低于對照。土壤中脲酶，磷酸酶，蛋白酶對PC

5、P的敏感程度為：脲酶>蛋白酶>磷酸酶。 可培養(yǎng)微生物僅占自然環(huán)境微生物的極少部分，用PCR-DGGE研究PCP處理過的土壤獲得不可培養(yǎng)培養(yǎng)微生物的信息，更全面的了解PCP對土壤微生態(tài)的影響。從DGGE的結果可以得出，PCP處理后的土壤，條帶的種類和亮度都有顯著的變化。它反映了處理體系中微生物區(qū)系的變化，特別是對PCP有降解和耐受能力有關菌類的發(fā)育過程。利用Quantitive one軟件對DGGE圖片進行分析，通過比較可發(fā)現，低

6、濃度之間有較高的相似性，高濃度之間的相似性變化較大，而高濃度和低濃度之間有較低的相似性。由此可以得出PCP對土壤微生物區(qū)系的有比較明顯的影響，而且隨著PCP濃度的升高，這種影響也越大。 試驗從經過PCP處理的土壤中篩選PCP的降解菌，并對該菌做了鑒定和降解效果的測定，為今后在生產實踐中運用該菌提供了理論和實施依據。通過平板篩選和搖床發(fā)酵對比篩選到了一株PCP的降解菌株，可以用于PCP的降解研究。該菌株在DGGE圖譜中也有對照條帶

7、為優(yōu)勢菌群。通過革蘭氏染色，16sRNA V3條帶的測序對比可以確定所篩選到的菌為假單胞菌屬。通過搖瓶發(fā)酵對該菌的降解效率和影響降解的因素作了初步測定。結果如下，該菌具有較好的降解效果，對300mg．Kg—1的PCP在36h內的降解效率可以達到100％，在500mg·Kg—1的情況下36h降解效率也可達到90％以上。接種量為3mL可以使PCP得到較好降解。添加微量濃度的葡萄糖，溫度30℃，pH值呈弱堿性，添加0．2％的吐溫—80有助于P