土壤微生物的篩選及其次級代謝產物的研究.pdf

1、微生物來源的先導化合物因其來源豐富、結構獨特等優(yōu)勢在藥物開發(fā)中占有不可估量的作用。然而，近年來隨著抗生素在臨床以及其他領域的廣泛應用，細菌耐藥性日益嚴峻。但近50年來，僅有利奈唑烷和達托霉素兩種新型結構的抗生素投入到臨床實踐中來，這在很大程度上提示了人類對新抗生素的研發(fā)迫在眉睫。
　　基于上述背景，本論文以土壤為材料，從中篩選具有抑菌活性的微生物，然后進行發(fā)酵、分離純化得到目標化合物，對其進行抗菌活性研究，最后進行化合物結構鑒定及

2、產生菌的菌種鑒定。
　　本研究以采自國內不同地區(qū)的5份土壤作為分離對象，共分離到197株菌，其中細菌96株，真菌43株，放線菌58株。對分離到的菌株進行發(fā)酵培養(yǎng)，然后采用杯碟法，對發(fā)酵產物進行抗菌活性測定得到21株具有抑菌活性的菌株。結合抑菌活性及HPLC圖譜，確定SIPI-2014406為主要研究菌株。
　　采用大孔吸附層析、反相C18層析對SIPI-2014406菌株的發(fā)酵液進行純化，得到化合物018和009。化合物01

3、8的純度98.3％，化合物009純度99.6%。
　　抑菌活性測定表明：化合物009與發(fā)酵液抑菌譜相似，為廣譜抗菌作用。但是化合物018的抑菌譜有所不同，對陰性菌抑菌作用更為敏感。采用常量肉湯微量測定化合物018、009對敏感菌株的MIC，化合物009對各種受測菌株抑制作用微弱；化合物018對陰性菌有明顯抑制作用，對陽性菌及真菌作用微弱。
　　氨基酸測定表明化合物009、018均含有氨基酸：D-Ser、L-Thr、L-Asp

4、、D-Asp、L-Glu、L-Pro、D-Tyr。綜合氨基酸組成、質譜、二級質譜和核磁共振分析及相關參考文獻推斷化合物009為normal-C14bacillomycin D，分子式為C48H74N10O15，并確定其結構式；化合物018分子式為 C50H78N10O15，結構式有待進一步研究。
　　基于16S rDNA序列的系統(tǒng)發(fā)育分析表明：該菌株SIPI-2014406與一株Bacillus sp. DOA6（芽孢桿菌DOA6