東北貫眾抗H1N1亞型豬流感病毒有效組分的研究.pdf

1、東北貫眾為粗莖鱗毛蕨(Dryopteris crassirhizoma Nakai)干燥的根莖及葉柄基部,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。在我國分布較廣,主產(chǎn)于黑龍江地區(qū),東北貫眾低毒,具有改善子宮平滑肌、抗腫瘤等作用,已為國內(nèi)外研究的熱點。
　　 目前東北貫眾的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生殖方式、鑒別及藥理活性等方面有了比較詳細(xì)的報道,但國內(nèi)外學(xué)者對東北貫眾抗病毒活性方面研究較少,東北貫眾抗H1N1亞型豬流感病毒(H1N1亞型SIV)的活性研究未見報道

2、。為了確定東北貫眾抗H1N1亞型SIV活性組分及其化學(xué)成分,本實驗以東北貫眾30％、60％7,醇提取物為研究材料,在MDCK細(xì)胞上采用MTT法篩選兩種組分的安全濃度,在此濃度下,采用細(xì)胞病變抑制法測定不同組分對H1N1亞型SIV誘導(dǎo)病變的MDCK細(xì)胞的保護率,反應(yīng)出體外抗病毒活性。結(jié)果表明,60％乙醇組分抗H1N1亞型SIV活性與濃度相關(guān),60％乙醇組分抗H1N1亞型SIV活性顯著,30％乙醇組分抗H1N1亞型SIV活性不顯著。因此,確

3、定東北貫眾60％乙醇組分為抗H1N1亞型SIV的主要活性組分。
　　 利用硅膠、ODS及HPLC等多種分離手段對東北貫眾60％乙醇組分進(jìn)行分離純化,從該組分中分離出8個化合物,采用1H—NMR和墻13C—NMR等波譜學(xué)手段進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析,確定了5個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu),它們是表兒茶素,(Z)-3,5,5-trimethyl-4-(3-(3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-tetrahydro-2H-p

4、yran-2-yloxy)butylidene)cyclohex-2-enone,β-谷甾醇,對羥基苯基丙烯酸,兒茶素。
　　 對5個化合物中含量最大的表兒茶素用細(xì)胞病變抑制法結(jié)合MTT比色法進(jìn)行體外抗H1N1亞型SIV活性實驗。結(jié)果表明,表兒茶素具有顯著抗H1N1亞型豬流感病毒活性,對H1N1亞型SIV誘導(dǎo)病變的MDCK細(xì)胞保護率達(dá)到52％。
　　 本文通過對東北貫眾抗H1N1亞型豬流感病毒有效組分的篩選、有效組分中化