豬附紅細(xì)胞體病的診斷及其病原體的免疫原性分析.pdf

1、豬附紅細(xì)胞體（Mycoplasma suis，M.suis）是一種寄生于豬血液中的一種微生物，能夠引起豬的發(fā)熱、貧血、黃疸等癥狀的血液感染性疾病。長期以來，由于該病多呈隱性感染，發(fā)病率較低，未引起人們的足夠重視。目前，豬附紅細(xì)胞體病在全國范圍內(nèi)呈大面積爆發(fā)和流行，對(duì)我國的養(yǎng)殖業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。但是，我們對(duì)于該病的診斷治療和預(yù)防仍然沒有較為有效的方法。同時(shí)國內(nèi)外對(duì)豬的研究相對(duì)較少，有關(guān)形態(tài)學(xué)特性、分類地位、診斷準(zhǔn)確性、有效預(yù)防等問題

2、都有待進(jìn)一步研究。所以為了有效的控制該病的發(fā)生，我們必須對(duì)該病原進(jìn)行深入的研究。本文采用在泰安地區(qū)豬場搜集的疑似病例進(jìn)行以下三個(gè)方面的研究：
　　 ⑴觀察發(fā)病豬的臨床癥狀，主要表現(xiàn)為：發(fā)熱、黃疸、呼吸急促、尿液濃黃，耳尖、四肢末端皮膚發(fā)紫；其病理學(xué)表現(xiàn)為：肺出血、水腫，肝臟、脾臟、淋巴結(jié)腫大，胃粘膜明顯出血、潰瘍。然后，對(duì)血液樣本進(jìn)行血涂片、吉姆薩染色和瑞氏染色。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞呈多形性，吉姆薩染色，M.suis 被染

3、成淡紫色；瑞氏染色，被染成紫色。并且，無菌采集血液并提取DNA模板；利用16SrRNA的一對(duì)通用引物，對(duì)豬附紅細(xì)胞體基因組DNA進(jìn)行PCR鑒定，擴(kuò)增出1400bp的特異性片段，與預(yù)期結(jié)果一致。該方法特異、靈敏、快熟，可從分子水平上對(duì)附紅細(xì)胞體進(jìn)行診斷。
　　 ⑵無菌法采取自然發(fā)病的豬附紅細(xì)胞體病的血液，從血液中分離M.suis，然后提取其基因組DNA。利用能擴(kuò)增多種動(dòng)物血營養(yǎng)菌部分16SrRNA基因的通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果

4、擴(kuò)增出大小約為1400bp的DNA片段。對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序并作系統(tǒng)進(jìn)化樹，結(jié)果與美國基因庫中的Illinois株同源性達(dá)97％以上。
　　 ⑶從自然感染的豬血液中純化豬附紅細(xì)胞體，應(yīng)用SDS-PAGE和免疫印跡試驗(yàn)對(duì)豬附紅細(xì)胞體抗原蛋白組分進(jìn)行初步分析。通過SDS-PAGE分離得到主要有13種蛋白質(zhì)，其蛋白分子量范圍為15Kd-170kD,分別是120kD，112kD，110kD，108 kD，68.2 kD，58.9kD,4