茶褐斑擬盤(pán)多毛孢對(duì)山茶致病機(jī)理的研究.pdf

1、本試驗(yàn)以茶褐斑擬盤(pán)多毛孢[Pestalotiopsis guepinii(Desm.)Stey]和園林綠化常用的山茶品種七心紅(Camellia pitardii)為試材，對(duì)茶褐斑擬盤(pán)多毛孢菌產(chǎn)生的致病相關(guān)因子--毒素和細(xì)胞壁降解酶進(jìn)行了多方面的研究。篩選出了茶褐斑擬盤(pán)多毛孢產(chǎn)毒的最佳培養(yǎng)條件，并對(duì)粗毒素的理化性質(zhì)作了進(jìn)一步的研究；對(duì)茶褐斑擬盤(pán)多毛孢在活體內(nèi)外產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶種類(lèi)、活性及其動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)細(xì)胞壁降解酶的動(dòng)力學(xué)特

2、性進(jìn)行了研究；通過(guò)毒素和細(xì)胞壁降解酶對(duì)山茶葉片各項(xiàng)生理生化指標(biāo)的影響，探索了茶褐斑擬盤(pán)多毛孢對(duì)山茶的致病機(jī)理。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.茶褐斑擬盤(pán)多毛孢在供試的液體培養(yǎng)基中可以產(chǎn)生對(duì)山茶有毒性作用的毒素，對(duì)茶褐斑擬盤(pán)多毛孢菌的產(chǎn)毒培養(yǎng)條件的研究表明，該病菌的最佳產(chǎn)毒培養(yǎng)基是Fries培養(yǎng)基，最佳產(chǎn)毒培養(yǎng)條件是：25℃、培養(yǎng)液初始pH5.0、連續(xù)光照、振蕩培養(yǎng)15d。
　　 2.用Fries培養(yǎng)基在最佳培養(yǎng)條件下培養(yǎng)出

3、的茶褐斑擬盤(pán)多毛孢菌濾液制備成粗毒素，通過(guò)檢測(cè)證明此粗毒素具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性；對(duì)pH敏感，耐酸堿能力較差，pH5.0時(shí)毒素致病活性最強(qiáng)；茶褐斑擬盤(pán)多毛孢粗毒素中具有生物活性的成分大多是極性較大的物質(zhì)。
　　 3.茶褐斑擬盤(pán)多毛孢在活體內(nèi)外均能產(chǎn)生一系列細(xì)胞壁降解酶，其中木聚糖酶、果膠甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、β-1，4-內(nèi)切葡聚糖酶(Cx)、β-葡萄糖苷酶在活體內(nèi)外的活性都較高，在致病過(guò)程中這幾種酶起著重要作用；而漆酶在活體內(nèi)

4、外的活性都很低，在致病過(guò)程中的作用較小。
　　 4.對(duì)木聚糖酶、PMG、Cx和β-葡萄糖苷酶的動(dòng)力學(xué)特性研究表明，PMG和Cx酶活反應(yīng)的最適溫度為50℃，β-葡萄糖苷酶和木聚糖酶反應(yīng)的最適溫度為60℃；Cx、β-葡萄糖苷酶和木聚糖酶的最適pH均為5.0，PMG的最適pH為5.0～6.0，說(shuō)明4種酶均傾向于弱酸性環(huán)境；Cx、PMG和木聚糖酶隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)酶活性下降，而β-葡萄糖苷酶活性隨反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)先急劇升高后緩慢下降；4種

5、細(xì)胞壁降解酶的最大反應(yīng)速度從大到小依次為木聚糖酶、PMG、β-葡萄糖苷酶、Cx，它們和相應(yīng)底物的親和力由弱到強(qiáng)順序?yàn)镻MG、Cx、木聚糖酶、β-葡萄糖苷酶。
　　 5.生理生化測(cè)定表明，茶褐斑擬盤(pán)多毛孢的致病性是毒素和細(xì)胞壁降解酶協(xié)同作用的結(jié)果。毒素和酶協(xié)同作用對(duì)山茶膜系統(tǒng)的損傷最大，毒素對(duì)細(xì)胞膜的損傷次之，果膠酶、纖維素酶和木聚糖酶主要在病害擴(kuò)展過(guò)程中起輔助作用；毒素在對(duì)山茶葉綠體的破壞中起主導(dǎo)作用；毒素和細(xì)胞壁降解酶均能在損