蟲生廣布擬盤多毛孢侵染對(duì)松突圓蚧胞外酶作用及酚氧化酶原影響的研究.pdf

1、松突圓蚧(Hemiberlesia pitysophila Takagi)是我國(guó)南方松林危害性極大的昆蟲,具有個(gè)體小、掩蔽性強(qiáng)等特點(diǎn),多寄生于松針葉鞘內(nèi),形成葉鞘和介殼的雙層保護(hù),因此防治難度比其他森林害蟲更大。蟲生廣布擬盤多毛孢(Entomogenous Pestalotiopsis disseminata)是一種防治松突圓蚧的生防菌,其對(duì)松突圓蚧具有強(qiáng)致病力,是一種利用分離于自然死亡蚧蟲尸體的真菌。本文通過研究蟲生廣布擬盤多毛孢GX

2、STYJ03侵染松突圓蚧產(chǎn)生的蛋白酶、幾丁質(zhì)酶、脂肪酶活性變化,以及蟲生廣布擬盤多毛孢對(duì)松突圓蚧酚氧化酶原系統(tǒng)的影響,探討蟲生廣布擬盤多毛孢GXSTYJ03胞外酶的作用、對(duì)松突圓蚧酚氧化酶原系統(tǒng)的影響,并分析影響蟲生廣布擬盤多毛孢對(duì)松突圓蚧致病的毒力因子,松突圓蚧對(duì)蟲生廣布擬盤多毛孢侵染的免疫反應(yīng)等,以探索蟲生廣布擬盤多毛孢對(duì)松突圓蚧的侵染機(jī)制和致病機(jī)理,為進(jìn)一步應(yīng)用蟲生廣布擬盤多毛孢對(duì)松突圓蚧的防治提供科學(xué)的理論參考。本研究的主要結(jié)果

3、如下:
　　1.通過對(duì)蟲生廣布擬盤多毛孢GXSTYJ03菌株不同孢子含量產(chǎn)酶活性的測(cè)定及其毒力相關(guān)性研究,1×107孢子/mL的蟲生廣布擬盤多毛孢孢子懸浮液是酶制劑生產(chǎn)和病蟲害防治的最佳使用量,該孢子濃度接種松突圓蚧后,松突圓蚧的校正死亡率比低濃度孢子懸液接種得到的校正死亡率高,且它們之間差異顯著;該濃度與1×108孢子/mL得到的校正死亡率差別不大。即當(dāng)蟲生廣布擬盤多毛孢孢子懸浮液的濃度為1×107孢子/mL時(shí),其蛋白酶、幾丁質(zhì)

4、酶、脂肪酶的產(chǎn)量最大,殺蟲的效果最好。
　　2.蟲生廣布擬盤多毛孢GXSTYJ03胞外蛋白酶、幾丁質(zhì)酶、脂肪酶活力與其對(duì)松突圓蚧致病力顯著相關(guān),即菌株毒力隨著蛋白酶、幾丁質(zhì)酶、脂肪酶活性的增高而增強(qiáng),用于侵染和致死松突圓蚧的效果也最好。
　　3.分別用Folin-酚法、DNS法和對(duì)硝基苯酚法測(cè)定蟲生廣布擬盤多毛孢GXSTYJ03蛋白酶、幾丁質(zhì)酶和脂肪酶的活力,結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛋白酶的產(chǎn)酶高峰期要早于幾丁質(zhì)酶和脂肪酶,為第5天;幾丁質(zhì)

5、酶產(chǎn)酶高峰為第7天;脂肪酶為第8天。而產(chǎn)蛋白酶的活性一般都高于幾丁質(zhì)酶和脂肪酶的活性。
　　4.松突圓蚧表皮蛋白質(zhì)的含量為85％,幾丁質(zhì)的含量為9%,脂肪的含量為6%。松突圓蚧表皮中蛋白質(zhì)的含量均高于幾丁質(zhì)、脂肪的含量,即蛋白質(zhì)﹥幾丁質(zhì)﹥脂肪。
　　5.酚氧化酶最適溫度為35℃,當(dāng)溫度在20-40℃的范圍內(nèi)該酶的穩(wěn)定性較高;酚氧化酶最適pH值為7.5,在pH6.5-7.5范圍內(nèi)表現(xiàn)出較高的穩(wěn)定性;以L-DOPA為底物,在一定

6、濃度范圍內(nèi)即濃度較小時(shí)隨濃度的增加而增加;在1-2mg/mL濃度時(shí)酚氧化酶表現(xiàn)出較高的活性,在2mg/mL濃度時(shí)酶活性有最大值;大于此濃度,酚氧化酶反應(yīng)速度隨著底物濃度的不斷增加反而呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。
　　6.蟲生廣布擬盤多毛孢GXSTYJ03對(duì)松突圓蚧的酚氧化酶激活系統(tǒng)具有顯著作用。研究表明,菌絲裂解液具有激活作用:血漿和血細(xì)胞裂解液中酚氧化酶的活性受到菌絲裂解液的影響后,活性能顯著提高;菌絲裂解液具有抑制作用:用昆布多糖將血漿或血

7、細(xì)胞裂解液中酚氧化酶原激活后,再加入菌絲裂解液,酚氧化酶的活性隨之下降。
　　7.松突圓蚧在受到蟲生廣布擬盤多毛孢GXSTYJ03侵染后出現(xiàn)明顯的酚氧化酶活性的上升,說明松突圓蚧對(duì)蟲生廣布擬盤多毛孢GXSTYJ03有一定的免疫反應(yīng)。受侵染的松突圓蚧與未受侵染的松突圓蚧接受昆布多糖注射后的酚氧化酶的酶活性水平差異顯著,前者活性水平比后者的低;另外,在受到侵染后的第5天開始,昆布多糖的注射已經(jīng)對(duì)酚氧化酶的沒有太大影響,差異性已不顯著,