我國(guó)黃瓜棒孢葉斑病的病原學(xué)及診斷技術(shù)的研究.pdf

1、多主棒孢(Corynespora cassiicola)是一種重要的植物病原真菌,寄主范圍極為廣泛。近年來,由該病原菌引起的黃瓜棒孢葉斑病在我國(guó)大面積的暴發(fā),造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本論文以我國(guó)不同來源的多主棒孢為研究對(duì)象,從病原菌的形態(tài)特征、致病力分化、遺傳多樣性等方面,分析我國(guó)多主棒孢的種群分化；另一方面建立了多主棒孢的檢測(cè)技術(shù),為土壤、種子帶菌檢測(cè)和早期診斷提供有效方法。
　　 1.2008年至2010年,在我國(guó)山東、河北、北

2、京、遼寧、吉林、河南、云南、海南等11個(gè)省市區(qū)調(diào)查棒孢葉斑病的危害,發(fā)現(xiàn)棒孢葉斑病已成為近年來我國(guó)蔬菜栽培中的重要病害,對(duì)黃瓜、番茄和茄子等蔬菜生產(chǎn)造成了巨大的損失。通過組織分離和顯微形態(tài)鑒定,從黃瓜、番茄和茄子等10種寄主上分離到130株多主棒孢(Corynespora cassiicola)。
　　 2.明確了我國(guó)茄子棒孢葉斑病病原菌為多主棒孢。通過致病性試驗(yàn)、形態(tài)學(xué)觀察及DNA序列比對(duì),確定我國(guó)茄子棒孢葉斑病的病原菌為多主

3、棒孢,而不是日本報(bào)道的Corynesporamelongenae Takimoto和印度報(bào)道的Corynespora melongena Sharma& Srivastava。
　　 3.發(fā)現(xiàn)我國(guó)不同寄主來源的多主棒孢存在明顯的致病力分化。通過人工接種,測(cè)定不同寄主來源的多主棒孢在黃瓜、番茄和茄子上的致病力,發(fā)現(xiàn)寄主來源同致病力分化之間具有顯著的相關(guān)性。侵染橡膠、番茄、豇豆和一串紅等花卉的菌株對(duì)非寄主植物無致病力或致病力較弱；侵

4、染黃瓜、茄子、苦瓜的多主棒孢侵染的寄主范圍較廣。相同寄主和相同地理來源的病原菌群體中致病力存在強(qiáng)、中、弱的差異。
　　 4.通過AFLP和ISSR標(biāo)記分析,發(fā)現(xiàn)了橡膠和番茄上的多主棒孢具有寄主?；?。根據(jù)AFLP和ISSR的譜帶構(gòu)建不同來源多主棒孢的UPGMA系統(tǒng)發(fā)育樹,將145個(gè)菌株分為兩個(gè)遺傳類群。類群Ⅰ主要是自橡膠上分離到的多主棒孢,與其它來源菌株的遺傳距離較遠(yuǎn),遺傳相似度小。類群Ⅱ?yàn)槠渌闹鱽碓吹木?其中番茄上分離到的

5、病原菌遺傳相似度極高,被劃分在一個(gè)亞類群中。
　　 5.ISSR分析結(jié)果顯示多主棒孢遺傳類群與地理來源有一定的相關(guān)性。依據(jù)不同地理來源多主棒孢的ISSR指紋圖譜構(gòu)建UPGMA系統(tǒng)發(fā)育樹,發(fā)現(xiàn)黃瓜上分離的多主棒孢分為2個(gè)遺傳類群,類群A為海南黃瓜棒孢葉斑病病原菌,類群B是從其它地區(qū)分離的菌株,2個(gè)類群之間的遺傳距離大于0.20,表明海南地區(qū)的菌株同其它地區(qū)的菌株具有顯著差異；東北、華北等內(nèi)陸栽培地采集的黃瓜棒孢葉斑病病原菌具有高度

6、相似性。
　　 6.根據(jù)多主棒孢ITS區(qū)序列設(shè)計(jì)了特異性引物CIRS／CIF5,建立多主棒孢的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)。對(duì)人工模擬的不同濃度帶菌土壤和種子進(jìn)行檢測(cè),表明該技術(shù)對(duì)土壤中多主棒孢的檢測(cè)下限為1個(gè)孢子／g土壤,1萬粒黃瓜種子有1粒帶菌即可被檢測(cè)到。
　　 7.以多主棒孢體可溶性蛋白為抗原,制備多克隆抗體,優(yōu)化斑點(diǎn)免疫吸附(Dot-ELISA)中抗原抗體的反應(yīng)濃度及作用時(shí)間,建立黃瓜棒孢葉斑病的Dot-ELIS