黃連葉斑病病原學(xué)及防治技術(shù)研究.pdf

1、黃連（Coptis chinensis Franch.）為毛茛科多年生草本植物，具有降火解毒、清熱燥濕以及抗腫瘤等功效，是重要的中藥材。湖北省是黃連主產(chǎn)區(qū)，近年來(lái)黃連葉斑病在湖北省的發(fā)病面積和危害程度呈加重趨勢(shì)，田間發(fā)病率在30％左右，但目前尚未見(jiàn)對(duì)該病害的病原學(xué)以及防治技術(shù)的深入研究。本文對(duì)黃連葉斑病的病原進(jìn)行了鑒定，研究了溫度、光照、碳源、氮源等對(duì)病原菌生長(zhǎng)的影響，并測(cè)定了10種殺菌劑以及1株生防菌株對(duì)該病原菌的防治效果，取得的主要

2、結(jié)果如下:
　　1、從湖北省恩施州太山廟黃連種植基地的發(fā)病植株上分離到Phoma sp.菌株，通過(guò)菌株的菌絲塊以及分生孢子懸浮液對(duì)黃連葉片的接種，證明了菌株P(guān)homa sp.為病原菌。該菌株在PDA培養(yǎng)基上的菌落為圓形，邊緣規(guī)則，菌絲呈絨狀，生長(zhǎng)速率較快;在OA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)則較慢，菌絲埋生，具分枝;分生孢子器黑褐色，大小為100.5～120μm×175.3～210μm;分生孢子無(wú)色，長(zhǎng)橢圓形或棍棒狀，單胞，大小為2～2.5μm×4

3、.1～5.4μm。該菌株ITS序列系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析結(jié)果表明，其與Phoma aquilegiicola(HM222537.1)的同源性為100％。因此根據(jù)形態(tài)學(xué)特征、分子鑒定結(jié)果以及莖點(diǎn)霉屬最新分類研究確定該菌株為耬斗菜莖點(diǎn)霉Calophomaaquilegiicola。
　　2、病原菌生物學(xué)特性研究結(jié)果表明，其在MA培養(yǎng)基上菌體茂密，菌絲發(fā)達(dá)，生長(zhǎng)5d后菌落平均直徑為6.72cm;病原菌在pH值4.0～10.0范圍內(nèi)均可生長(zhǎng)，在

4、pH值為6.0時(shí)生長(zhǎng)效果最好;該病原菌在4～25℃內(nèi)均能生長(zhǎng)，最適溫度為20℃;不同的光照條件對(duì)該病原菌生長(zhǎng)的影響無(wú)顯著性差異;在所有供試碳源中，病原菌對(duì)麥芽糖的利用效果最好，對(duì)蔗糖和甘露醇的利用效果最差;在所有供試氮源中，對(duì)蛋白胨利用最好，對(duì)硝酸銨的利用最差;病原菌菌絲生長(zhǎng)和分生孢子萌發(fā)的致死溫度為50℃水浴10min。
　　3、室內(nèi)藥劑篩選實(shí)驗(yàn)表明，在供試的10種藥劑中，所有藥劑對(duì)黃連葉斑病病菌均表現(xiàn)出了一定的抑制作用，但是不

5、同種類藥劑的防治效果存在明顯的差異。10％苯醚甲環(huán)唑?qū)S連葉斑病病原菌的防治效果最好，EC50值為0.0252μg/ml;其次是206.7g/L噁酮氟硅唑，其EC50值是0.8016μg/ml;20％甲基立枯磷、70％甲基托布津等殺菌劑抑菌效果相對(duì)較差。盆栽試驗(yàn)表明，10％苯醚甲環(huán)唑施藥5天后病害發(fā)病率僅為3.8％，病情指數(shù)為0.96，防治效果達(dá)96.5％;25％戊唑醇處理后葉片發(fā)病率為7.33％，病情指數(shù)為1.83，防治效果為93.2

6、9％;206.7g/L噁銅氟硅唑處理后對(duì)黃連葉斑病的防治效果為92.05％。
　　4、生防菌株ES-89分離自恩施州黃連根系土壤，通過(guò)培養(yǎng)性狀和菌株形態(tài)學(xué)觀察，結(jié)合16S rDNA分子鑒定，確定菌株ES-89為伯克霍爾德氏菌（Burkholdria sp.）。平板對(duì)峙實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其對(duì)黃連葉斑病病原菌的抑菌率在57％以上;ES-89不同濃度的發(fā)酵上清液均能夠抑制黃連葉斑病菌菌絲生長(zhǎng)，當(dāng)發(fā)酵上清液與PDA體積比在1∶3時(shí)，抑制率達(dá)95％以