條斑紫菜TPS基因轉(zhuǎn)化馬鈴薯的研究.pdf

1、馬鈴薯是世界上重要的糧菜兼用型作物，馬鈴薯生長(zhǎng)需要大量水分且對(duì)鹽敏感，本研究目的是將條斑紫菜6-磷酸海藻糖合成酶基因（PyTPS）導(dǎo)入馬鈴薯后獲得轉(zhuǎn)基因植株，為篩選出耐鹽、抗旱的轉(zhuǎn)基因品系奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、建立了以微型薯切片和莖段為外植體直接形成不定芽的再生途徑
　　 選用微型薯切片、試管苗莖段為外植體材料，建立了直接形成不定芽途徑的再生途徑。魯引一號(hào)、夏波蒂、克新18、大西洋、費(fèi)烏瑞它5個(gè)品種微型

2、薯切片不定芽直接誘導(dǎo)優(yōu)化培養(yǎng)基為:2MS+2mg/LIAA+1mg/L6-BA+4mg/LZT+6mg/LKT，分化率分別為95.0％、97.5％、87.5％、97.5％、82.5％;Desiree品種莖段不定芽直接誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:2MS+1mg/LAA+1mg/L6-BA+2mg/LZT+3mg/LKT，分化率為90.1％。
　　 2、建立了以微型薯切片和莖段為外植體愈傷形成與分化途徑
　　 5個(gè)品種微型薯切片愈傷誘導(dǎo)的

3、培養(yǎng)基為2MS+4mg/L6-BA+0.5mg/LNAA，魯引一號(hào)、夏波蒂、克新18、大西洋、費(fèi)烏瑞它愈傷誘導(dǎo)率分別為92.5％、97.5％、82.5％、95.0％、77.5％，5個(gè)品種分化培養(yǎng)基為2MS+5mg/L6-BA+1mg/LZT，分化率分別為87.5％、95.0％、77.5％、95.0％、77.5％;Desiree品種莖段愈傷誘導(dǎo)的培養(yǎng)基2MS+2mg/L6-BA+0.5mg/LNAA，愈傷誘導(dǎo)率為90.1％,分化培養(yǎng)基為2

4、MS+5mg/L6-BA+2mg/LZT，分化率為91.4％。不定芽在MS基本培養(yǎng)基上可順利生根，形成完整的植株。
　　 3、進(jìn)行了試管苗耐鹽性初步研究
　　 將NaCl添加到MS基本培養(yǎng)基中進(jìn)行鹽脅迫實(shí)驗(yàn)。設(shè)置0％、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1.0％NaCl濃度對(duì)馬鈴薯試管苗進(jìn)行脅迫處理，結(jié)果表明，0.2％NaCl是植株普遍可以耐受的鹽濃度。NaCl濃度增大到0.6％、0.8％、1.0％時(shí)，試管苗停止生長(zhǎng)

5、，均不能生根。
　　 4、建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化體系，獲得了轉(zhuǎn)基因植株
　　 建立和優(yōu)化了轉(zhuǎn)化體系:最終確定預(yù)培養(yǎng)時(shí)間為3天，Km的濃度為50mg/L，Carb濃度為500mg/L，農(nóng)桿菌濃度為OD值為0.5，侵染時(shí)間為5分鐘，共培養(yǎng)時(shí)間為2天。用農(nóng)桿菌EHA105(pCAMBIA2300-PyTPS)侵染魯引一號(hào)馬鈴薯的微型薯切片外植體，經(jīng)卡那霉素抗性篩選獲得了抗性不定芽，卡那霉素抗性植株經(jīng)PCR檢測(cè)擴(kuò)增出了500bp