應用real-time RT-PCR研究柑桔衰退病毒弱毒株對強毒株的拮抗作用.pdf

1、柑桔是世界第一大水果，總產(chǎn)量1.2億噸左右。2007年我國柑桔種植面積和產(chǎn)量均躍居世界第一。由柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus，CTV)引起的柑桔衰退病是世界范圍內(nèi)一種重要的病害，在我國分布也極為普遍。目前對該病的主要防治措施包括弱毒株交叉保護(Mild Strain Cross Protection，MSCP)技術來防治莖陷點型衰退病。
　　 本研究在錦橙植株預先嫁接接種CTV弱毒株CT 11之后第7個

2、月，使用褐色橘蚜(25頭/株)進行CTV強毒株CT14拮抗接種試驗。分別在拮抗接種15、30、45、60及90天后采用微量Trizol法抽提總RNA，同時在柑桔18S rRNA及nad5兩個內(nèi)參基因共同校正的基礎上，運用real-time RT-PCR(real-time fluorescence quantitative RT-PCR，實時熒光定量RT-PCR)技術對供試植株體內(nèi)CTV強弱毒株的含量變化進行監(jiān)測。本研究結(jié)果將有助于揭示

3、MSCP防治CTV的機理。主要研究結(jié)果如下：
　　 1)嫁接接種后6個月內(nèi)弱毒株的p25基因在甜橙中表達的高峰期存在差異。隨著時間和季節(jié)推移，CTV的量會出現(xiàn)波動過程。
　　 2)當25頭蚜蟲接種CTV強毒株CT14至兩年生無毒錦橙實生苗(正對照)后15至60天，供試植株的葉/皮可陸續(xù)檢測出CTV。整個拮抗試驗中大多數(shù)植株皮中CTV含量比葉中的含量更高。然而蚜蟲接種正對照的嫩梢時發(fā)現(xiàn)，一半植株中嫩葉比嫩皮更早檢測到CTV

4、，而且多數(shù)植株的嫩葉中CTV含量比皮更早達到高峰。但最終在大多數(shù)植株中CTV在皮中的含量高于葉中CTV的含量。
　　 3)預免疫植株在褐色桔蚜拮抗接種后十個月仍未能檢測到強毒株CT14。表明在25頭蚜蟲攻毒壓力下，弱毒株CT11能夠有效的阻止強毒株CT14的侵入或增殖，對甜橙植株起到很好的保護效果。
　　 4)預免疫植株在拮抗接種45天內(nèi)其多數(shù)樣品內(nèi)(10/14，7個植株的葉和皮)弱毒株CT11的相對表達量迅速升高，且高