應(yīng)用real-time RT-PCR研究柑桔衰退病毒弱毒株對(duì)強(qiáng)毒株的拮抗作用.pdf

1、柑桔是世界第一大水果，總產(chǎn)量1.2億噸左右。2007年我國(guó)柑桔種植面積和產(chǎn)量均躍居世界第一。由柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus，CTV)引起的柑桔衰退病是世界范圍內(nèi)一種重要的病害，在我國(guó)分布也極為普遍。目前對(duì)該病的主要防治措施包括弱毒株交叉保護(hù)(Mild Strain Cross Protection，MSCP)技術(shù)來(lái)防治莖陷點(diǎn)型衰退病。
　　 本研究在錦橙植株預(yù)先嫁接接種CTV弱毒株CT 11之后第7個(gè)

2、月，使用褐色橘蚜(25頭/株)進(jìn)行CTV強(qiáng)毒株CT14拮抗接種試驗(yàn)。分別在拮抗接種15、30、45、60及90天后采用微量Trizol法抽提總RNA，同時(shí)在柑桔18S rRNA及nad5兩個(gè)內(nèi)參基因共同校正的基礎(chǔ)上，運(yùn)用real-time RT-PCR(real-time fluorescence quantitative RT-PCR，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR)技術(shù)對(duì)供試植株體內(nèi)CTV強(qiáng)弱毒株的含量變化進(jìn)行監(jiān)測(cè)。本研究結(jié)果將有助于揭示

3、MSCP防治CTV的機(jī)理。主要研究結(jié)果如下：
　　 1)嫁接接種后6個(gè)月內(nèi)弱毒株的p25基因在甜橙中表達(dá)的高峰期存在差異。隨著時(shí)間和季節(jié)推移，CTV的量會(huì)出現(xiàn)波動(dòng)過(guò)程。
　　 2)當(dāng)25頭蚜蟲(chóng)接種CTV強(qiáng)毒株CT14至兩年生無(wú)毒錦橙實(shí)生苗(正對(duì)照)后15至60天，供試植株的葉/皮可陸續(xù)檢測(cè)出CTV。整個(gè)拮抗試驗(yàn)中大多數(shù)植株皮中CTV含量比葉中的含量更高。然而蚜蟲(chóng)接種正對(duì)照的嫩梢時(shí)發(fā)現(xiàn)，一半植株中嫩葉比嫩皮更早檢測(cè)到CTV

4、，而且多數(shù)植株的嫩葉中CTV含量比皮更早達(dá)到高峰。但最終在大多數(shù)植株中CTV在皮中的含量高于葉中CTV的含量。
　　 3)預(yù)免疫植株在褐色桔蚜拮抗接種后十個(gè)月仍未能檢測(cè)到強(qiáng)毒株CT14。表明在25頭蚜蟲(chóng)攻毒壓力下，弱毒株CT11能夠有效的阻止強(qiáng)毒株CT14的侵入或增殖，對(duì)甜橙植株起到很好的保護(hù)效果。
　　 4)預(yù)免疫植株在拮抗接種45天內(nèi)其多數(shù)樣品內(nèi)(10/14，7個(gè)植株的葉和皮)弱毒株CT11的相對(duì)表達(dá)量迅速升高，且高