Real-time PCR檢測風疹病毒方法學的建立及初步應用.pdf

1、 本文目的是建立一種應用于臨床的風疹病毒定量檢測方法；準確反映體內(nèi)病毒復制情況，為探討病毒感染量與致病性關(guān)系，以及為臨床治療提供科學依據(jù)。方法：利用RT-PCR方法擴增并回收RV BR1株包膜糖蛋白E1的基因片段，將其與pMD18-T載體連接，經(jīng)氨芐青霉素篩選、酶切鑒定，以獲得RV E1蛋白基因的克隆質(zhì)粒。將此質(zhì)粒用752分光光度儀定量，做對數(shù)關(guān)系稀釋；以FAM作為熒光指示劑，進行實時定量聚合酶鏈反應(Real-time PCR)

2、。以不同對數(shù)關(guān)系的稀釋濃度和相應的閾值循環(huán)數(shù)(Ct)為相應的X、Y軸，繪制標準曲線。然后用我們所建立的方法檢測19例從臨床收集到的懷疑為風疹病毒感染的患者血清標本，并將檢測結(jié)果與經(jīng)典的ELISA方法進行比較。結(jié)果指出：本課題所建立的Real-time PCR方法能較好地檢測出血清中風疹病毒的載量，代表了臨床基因檢測技術(shù)的最新發(fā)展趨勢，具有較強的敏感性和特異性，且由電腦分析數(shù)據(jù)，結(jié)果客觀，易于判斷，因此有望取代血清學技術(shù)，成為風疹病毒定量