蛋氨酸對0~21日齡北京鴨羽毛發(fā)育的影響.pdf

1、本論文通過兩個(gè)實(shí)驗(yàn)研究了蛋氨酸對羽毛發(fā)育的影響,從羽毛發(fā)育的角度探討北京鴨蛋氨酸需要量,通過酶聯(lián)免疫和蛋白質(zhì)組學(xué)等方法綜合研究蛋氨酸對羽毛角蛋白組成的影響及其分子機(jī)理。同時(shí)構(gòu)建北京鴨游離毛囊體外培養(yǎng)模型,并對其進(jìn)行形態(tài)學(xué)和組織學(xué)觀察。
　　 試驗(yàn)一研究了蛋氨酸對生長前期北京鴨羽毛發(fā)育的影響。結(jié)果表明,蛋氨酸水平對于絨羽千朵重、絨羽長和正羽百根重、正羽長均具有顯著影響(P<0.05)。羽毛總重和絨羽指標(biāo)隨日糧蛋氨酸水平表現(xiàn)為顯著的

2、二次曲線變化規(guī)律(P<0.05),依據(jù)二次曲線模型,達(dá)到最佳羽毛總重的蛋氨酸需要量為0.476％,達(dá)到最佳絨羽長和絨羽千朵重的蛋氨酸需要量分別為0.482％和0.485％?？梢?絨羽良好發(fā)育可能需要更高水平的蛋氨酸。日糧蛋氨酸水平對于生長前期北京鴨正羽和絨羽含硫量影響不顯著(P>0.05),而絨羽含硫量顯著高于正羽(P<0.05)。日糧蛋氨酸水平對肝臟中胱硫醚合酶(CBS)活性具有顯著影響(P<0.05),對皮膚CBS活性影響不顯著(P

3、>0.05)。皮膚中的CBS活性極顯著高于肝臟中CBS活性(P<0.01)。通過對正羽和絨羽角蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析。運(yùn)用Image Master2D Elite5.0分析軟件,對高蛋氨酸正羽組、低蛋氨酸正羽組、高蛋氨酸絨羽組和低蛋氨酸絨羽組雙向凝膠電泳的銀染圖譜進(jìn)行圖像匹配分析。結(jié)果顯示低蛋氨酸正羽組與高蛋氨酸正羽組之間差異表達(dá)蛋白共19個(gè):其中7個(gè)只在低蛋氨酸組表達(dá),8個(gè)只在正常蛋氨酸組表達(dá)。其余4個(gè)差異點(diǎn)在低蛋氨酸組表達(dá)上調(diào)(表達(dá)

4、量高于正常蛋氨酸組3倍以上)。低蛋氨酸絨羽組與正常蛋氨酸絨羽組之間差異蛋白11個(gè)。其中4個(gè)只在低蛋氨酸組表達(dá),3個(gè)只在正常蛋氨酸組表達(dá)。其余4個(gè)差異點(diǎn)中有1個(gè)在正常組表達(dá)上調(diào),3個(gè)在低蛋氨酸組表達(dá)上調(diào)。綜合考慮差異性和蛋白點(diǎn)大小,選出16個(gè)差異蛋白點(diǎn),運(yùn)用MALDI-TOF-MS／MS進(jìn)行肽指紋圖譜鑒定。通過對不同蛋氨酸水平下的正羽和絨羽圖譜比較,并未發(fā)現(xiàn)具有顯著差異(3倍以上)的角蛋白點(diǎn)。可見,蛋氨酸水平并不會對正羽和絨羽的角蛋白組成

5、產(chǎn)生影響。通過對正羽和絨羽圖譜比較,發(fā)現(xiàn)絨羽中KRT86和KRT9較正羽表達(dá)量高(3倍以上)。綜上所述,蛋氨酸水平顯著影響生長前期北京鴨正羽長、正羽百根重、絨羽長和絨羽千朵重；絨羽良好發(fā)育需要的蛋氨酸水平比正羽高；皮膚中CBS活性顯著高于肝臟并且維持相對穩(wěn)定,這使得羽毛含硫量和角蛋白組成維持穩(wěn)定。
　　 試驗(yàn)二的內(nèi)容是構(gòu)建北京鴨游離毛囊體外培養(yǎng)模型并進(jìn)行形態(tài)學(xué)和組織學(xué)觀察。結(jié)果表明,在無血清DMEM培養(yǎng)基中,北京鴨次級毛囊出現(xiàn)不