利用SRAP標(biāo)記構(gòu)建菏澤牡丹優(yōu)良品種指紋圖譜.pdf

1、本研究以菏澤采集的33個(gè)牡丹品種為實(shí)驗(yàn)材料，CTAB裂解-硅珠吸附法提取基因組DNA，建立了SRAP-PCR擴(kuò)增的最佳反應(yīng)體系，利用SRAP標(biāo)記構(gòu)建不同品種的指紋圖譜。 牡丹基因組DNA的提取以CTAB裂解-硅珠吸附法為基礎(chǔ)，比較CTAB裂解和與SDS裂解以及不同抽提方法的效果，最終確定適合牡丹基因組DNA提取純化方法，即CTAB裂解，24：1氯仿-異戊醇抽提一次。 在正交設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上，得出了牡丹SRAP-PCR最佳反應(yīng)

2、體系，即25υL反應(yīng)體系包括：Taq酶0.5U，Mg2+2.0mmol/L，模板DNA50ng，dNTPs0.2 mmol/L，引物0.30μmol/L。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；94℃變性1min，35℃復(fù)性1min，72℃延伸1.5min，5個(gè)循環(huán)；94℃變性1min，50℃復(fù)性1min，72℃延伸1.5min，35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10min，4℃保存。 從648對(duì)引物組合中，篩選出16對(duì)引物組合用于檢測(cè)品種的

3、遺傳多樣性和指紋圖譜構(gòu)建。SRAP標(biāo)記平均每對(duì)引物組合的譜帶數(shù)和多態(tài)性帶數(shù)分別為20.4個(gè)和11.2個(gè)，多態(tài)性帶的比例為54.2％。表明SRAP標(biāo)記是一種經(jīng)濟(jì)、有效和可靠的分子標(biāo)記手段。 引物組合Em23-Me15對(duì)33個(gè)牡丹品種進(jìn)行擴(kuò)增，均獲得了帶型豐富且清晰可辨的DNA指紋圖譜。擴(kuò)增片段的大小主要集中在100-1000bp范圍內(nèi)，33個(gè)牡丹品種的圖譜各不相同，引物組合Em23-Me15能將33個(gè)品種完全分開(kāi)。 利用N

4、TSYS-pc2.10統(tǒng)計(jì)分析軟件，采用遺傳相似系數(shù)UPGMA法進(jìn)行對(duì)33個(gè)牡丹品種聚類(lèi)分析。結(jié)果表明重瓣性低的品種與重瓣性高的品種間存在較大的遺傳差異?；使谛团c托桂型品種有較近的親緣關(guān)系。單花類(lèi)和臺(tái)閣類(lèi)有分別聚在一起的趨勢(shì)，但與牡丹花型分類(lèi)不完全一致，這可能與牡丹長(zhǎng)期引種、選擇和反復(fù)雜交等導(dǎo)致的品種來(lái)源復(fù)雜有關(guān)。在牡丹品種分類(lèi)鑒定時(shí)應(yīng)綜合運(yùn)用各種遺傳標(biāo)記，將微觀與宏觀方法全面有序地結(jié)合起來(lái)，才能構(gòu)建既實(shí)用又能準(zhǔn)確的反映品種間的演化關(guān)系