利用微衛(wèi)星標(biāo)記構(gòu)建壇紫菜品系的DNA指紋圖譜.pdf

1、隨著人類活動(dòng)的不斷擴(kuò)大，野生壇紫菜種質(zhì)資源生存遭受嚴(yán)重威脅，優(yōu)良種質(zhì)日益減少。而栽培壇紫菜也由于缺乏優(yōu)良栽培品種或品系，生產(chǎn)實(shí)踐中屢屢出現(xiàn)“白網(wǎng)”、“爛菜”現(xiàn)象，致使養(yǎng)殖戶遭受經(jīng)濟(jì)損失。許多實(shí)驗(yàn)室為了培育壇紫菜優(yōu)良品種或品系，通過(guò)對(duì)具有優(yōu)良性狀的野生或栽培壇紫菜進(jìn)行組織、單細(xì)胞克隆培養(yǎng)，獲得絲狀體純系進(jìn)行室內(nèi)保種。由于壇紫菜葉狀體個(gè)體或絲狀體品系間缺乏可靠的形態(tài)學(xué)分類特征，所以在一定程度上增加了壇紫菜優(yōu)良品種選育的難度。為此嘗試?yán)脳l斑

2、紫菜的EST序列來(lái)研究壇紫菜的微衛(wèi)星標(biāo)記，以期為壇紫菜遺傳育種和分子輔助育種提供一種新的、可靠的輔助方法。 利用壇紫菜葉狀體對(duì)幾種常見(jiàn)的紫菜DNA提取方法—SDS裂解法、CTAB法、LiCl法及試劑盒法進(jìn)行了一個(gè)簡(jiǎn)單、全面的比較，結(jié)果表明提取的DNA量：LiCl法> CTAB法>試劑盒法> SDS裂解法，純度：試劑盒法> CTAB法> LiCl法> SDS裂解法。同時(shí)利用兩種試劑盒對(duì)壇紫菜絲狀體進(jìn)行了DNA 提取，發(fā)現(xiàn)其提取效果

3、要遠(yuǎn)好于葉狀體。 應(yīng)用Blast軟件從20,979條條斑紫菜EST序列中篩選微衛(wèi)星位點(diǎn),共發(fā)現(xiàn)非冗余微衛(wèi)星位點(diǎn)211個(gè)，占整個(gè)條斑紫菜EST數(shù)據(jù)庫(kù)的1.01﹪。其中雙堿基重復(fù)微衛(wèi)星位點(diǎn)35個(gè)，三堿基有176個(gè)。從篩選出的微衛(wèi)星位點(diǎn)中設(shè)計(jì)、合成15對(duì)引物，其中11對(duì)引物在壇紫菜上獲得了種間轉(zhuǎn)移擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物的主要條帶經(jīng)過(guò)回收、克隆、測(cè)序發(fā)現(xiàn)大部分引物對(duì)的條帶都含有與期望一致的微衛(wèi)星重復(fù)序列，也有與期望不一致的重復(fù)序列，還有些引物對(duì)

4、的擴(kuò)增產(chǎn)物中不含重復(fù)序列。 通過(guò)對(duì)壇紫菜葉狀體的擴(kuò)增、條帶回收克隆、測(cè)序，篩選出6對(duì)引物用于6個(gè)不同絲狀體品系的DNA指紋圖譜的構(gòu)建，6個(gè)引物對(duì)共擴(kuò)增出40個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)的數(shù)目為37個(gè)，比例高達(dá)92.50﹪。其中引物組合AU195385和AU191289的5個(gè)位點(diǎn)、AV435669和AU187410的6個(gè)位點(diǎn)、AU196400和AU1920940的6個(gè)位點(diǎn)構(gòu)建的3個(gè)DNA指紋圖均能很好地分開(kāi)6個(gè)不同品系。 根據(jù)6